Leishmania infantummodelo de infección in vitro. Aplicaciones al cribado farmacológico

  1. Lara Ordóñez Gutiérrez
Supervised by:
  1. José María Alunda Rodríguez Director
  2. Susana Méndez Sierra Director

Defence university: Universidad Complutense de Madrid

Year of defence: 2008

Committee:
  1. Francisco Bolas Fernández Chair
  2. Concepción de la Fuente López Secretary
  3. José M. Requena Rolanía Committee member
  4. Vicente Larraga Rodríguez de Vera Committee member
  5. Antonio Osuna Carrillo De Albornoz Committee member
Department:
  1. Sanidad Animal

Type: Thesis

Teseo: 179041 DIALNET

Abstract

Las leishmaniosis son un grupo de enfermedades causadas por infección por protozoos del género Leishmania. El curso clínico de estas enfermedades es muy variable, en dependencia del hospedador y, sobre todo, de la especie de Leishmania responsable. En nuestro área geográfica la única implicada tanto en las leishmaniosis humana como canina es >L. infantum. Esta enfermedad es considerada como reemergente en medicina humana y es muy prevalente en la población canina en España, que actúa como reservorio. Por ello, en cualquier caso, el control de la leishmaniosis humana implica necesariamente el control de la leishmaniosis canina. El tratamiento quimioterápico no es ideal y no garantiza la curación parasitológica de los perros tratados, permitiendo así que éstos sean infectantes para los vectores. Además, la aparición de aislados resistentes de Leishmania a los antimoniales ha complicado aún más el control de esta enfermedad. En estas condiciones, otros compuestos, tales como la antotericina B -compuesto leishmanicida eficaz aunque tóxico- o el uso de formulaciones de menor toxicidad, pueden ser una alternativa terapéutica. En nuestro estudio se ha optimizado un método de infecciín in vitro de macrófagos con L. infantum (línea celular J774, 33º C. 5% CO2). El método de infección desarrollado es de tipo permisivo, con internalización u notable multiplicación de amastigotes. Los niveles de infección dependen de la opsonización de los promastigotes y del aislado de L. infantum empleado. Entre los aislados estudiados, UCM 20 mostró los niveles más elevados de carga parasitaria. Se ha demostrado in vitro que la encapsulación de anfotericina B en microesferas de albúmina aumentan la capacidad leishamanicida del compuesto con dosis menores de éste. Por otra parte, el estado de agregación del compuesto ejerce un importante papel, ya que la forma monomérica, logró los resultados más notables. La menor toxicidad de estas formulaciones, así como el bajo coste de estas preparaciones apuntan a su interés en el tratamiento de la leishmaniosis. De igual modo, el potente efecto leishmanicida, reducia toxicidad y posibilidad de expresión mediante tecnología de ADN recombinante de la fitocistatina HvCP16, sugieren su utilización en la terapéutica de la lesihmaniosis a un reducido coste. Uno de los factores limitantes de los ensayos con infecciones por Leishmania es la laboriosidad de los recuentos celulares. La aplicación, por nuestra parte, de la técnica de PCR cuantitativa supone una notable ventaja al obtener resultados de forma rápida, sencilla y fiable en los estudios in vitro. Esta técnica, combinada con la utilización de la sonda Taqman, aumenta su sensibilidad y reduce el tiempo necesario para la obtención de resultados en los estudios de virulencia in vitro en la valoración de fármacos frente a L. infantum.