Obtención y caracterización de lcls mutantes defectivas en la expresión de dp y estudio de los determinantes implicados en el reconocimiento de este locus

Resumen

SE HAN OBTENIDO UNA SERIE DE MUTANTES DEFECTIVOS EN LA EXPRESION DE DP EN LCLS, MEDIANTE LA UTILIZACION DEL AGENTE MUTAGENICO ICR 191 Y SELECCION CON CTLS ALOESPECIFICAS PARA DPW2. SE HA PROCEDIDO A LA CARACTERIZACION DE ESTOS Y DE OTROS MUTANTES OBTENIDOS PREVIAMENTE EN EL LABORATORIO, HAPLOIDES Y DIPLOIDES PARA EL HLA. LA MAYORIA DE LOS MUTANTES HAPLOIDES NO EXPRESAN, NI EN SUPERFICIE NI EN EL CITOPLASMA, LA MOLECULA DE DP, EXCEPTO DOS, LO QUE SUGIERE QUE EN ESTOS MUTANTES, LA MUTACION HA AFECTADO LA CORRECTA SINTESIS DE ESTAS PROTEINAS. LA CARACTERIZACION DE LA EXPRESION DE DP, EN SUPERFICIE Y TOTAL, EN LOS MUTANTES DIPLOIDES, NOS INDICA QUE TRES DE LOS MUTANTES NO EXPRESAN EN SUPERFICIE EL ALELO DPW2, MIENTRAS QUE UNO DE ELLOS SI EXPRESA ESTA MOLECULA, INDICANDO QUE LOS EPITOPOS RECONOCIDOS POR LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES Y LOS CTLS SON DIFERENTES. SE HA ESTUDIADO EL RECONOCIMIENTO DE CIERTOS CLONES ALOESPECIFICOS PARA DPW2, DENOMINADOS "HETERODOXOS" DE CIERTAS LCLS. ESTOS CLONES NO RECONOCIAN DICHAS LINEAS CELULARES. PARA COMPROBAR QUE NO ERA UNA ALTERACION DE LA MOLECULA DE DP LA RESPONSABLE DEL NO RECONOCIMIENTO, SE REALIZO LA SECUENCIA GENICA DE LA CADENA BETA DE DPW2 EN UNA DE LAS LCLS ESTUDIADAS. AL NO EXISTIR UNA PEQUEÑA MUTACION RESPONSABLE DEL NO RECONOCIMIENTO POSTULAMOS LA HIPOTESIS DE LA EXISTENCIA DE UN PEPTIDO QUE FUERA CORRECONOCIDO CON DP. PARA IDENTIFICAR LA PROTEINA DE LA CUAL SE DERIVASE EL PEPTIDO IMPLICADO EN EL RECONOCIMIENTO HICIMOS DOS PLANTEAMIENTOS. ESTUDIOS DEL RECONOCIMIENTO A CARGO DE LOS CLONES "HETERODOXOS" DE TRANSFECTANTES DE DR ALFA Y TRAS LA ADICION DE UN EXTRACTO CELULAR DE LCLS TRATADO CON CNBR. LOS RESULTADOS NEGATIVOS DE AMBOS EXPERIMENTOS INDICARON QUE NO ERA DR LA MOLECULA IMPLICADA EN EL RECONOCIMIENTO Y QUE EL METODO DE ADICION DE PEPTIDOS NO ES EL MAS ADECUADO. POR ULTIMO, HEMOS OBTENIDO UNOS HIBRIDOS SOMATICOS DE ESTABILIDAD TRANSITORIA, CON UNA VIDA MEDIA DE TRES SEMANAS