Caracterizacion molecular de los genes rib3 y rib4, implicados en la sintesis de 6,7-dimetil-8-ribitil-lumazina en saccharomyces cerevisiae

Resumen

La sintesis de 6,7-dimetil-8-ribitil-luzamina en s. Cerevisiae es la etapa previa a la biosintesis de riboflavina. En ella estan implicadas dos proteinas, codificadas por los genes rib3 y rib4. El gen rib3 ha sido clonado como un fragmento psti-pvuii de 1.5 kb. Este gen codifica una proteina de 24 kda, que ha sido purificada y se ha podido comprobar que posee actividad sintetasa de 3,4-dihidroxi-2-butanona-4-fosfato. El gen rib4 se ha aislado como un fragmento bg1ii-hpai de 2.1 db, que codifica una proteina de 18.6 kda. La proteina ha sido purificada y se ha comprobado que posee actividad sintetasa de 6,7-dimetil-8-ribitil-lumazina, y que en condiciones nativas presenta un tamaño molecular de 95 kda, por lo que se trata de un pentamero con cinco subunidades identicas. Los genes rib3 y rib4 han sido fusionados a promotores fuertes, ppgk y ptef1 respectivamente, consiguiendose un aumento en las actividades enzimaticas relacionadas de 80 a 100 veces respecto a una cepa silvestre.