Replicación inducida por estrés térmico en bacterias y plásmidos

Resumen

La duplicación del genoma de una célula antes de su división es un proceso esencial en el ciclo celular. "Escherichia coli" posee un único cromosoma circular que es replicado de forma precisa una vez por ciclo celular. El grupo de investigación donde se ha desarrollado esta Tesis Doctoral ha descrito y caracterizado la replicación inducida por estrés térmico, HIR (Heat Induced Replication), en el cromosoma de E. coli que escapa al control del ciclo celular. Una vez que HIR ha sido definida en E. coli, en esta Tesis se amplia el estudio de HIR a otros replicones bacterianos. Se ha estudiado HIR en los genomas de otras especies bacterianas modelo ("Salmonella tyhpimurium", "Bacillus subtilis" y "Vibrio cholerae") y en varios plásmidos de E. coli con diferente control de la replicación (minicromosomas, F, P1?incA, pSC101, R1, p15A y pBR322). El propósito global de este trabajo es el de conocer la generalidad del mecanismo de HIR en el mundo bacteriano y determinar sus requerimientos en los diferentes replicones. Otro aspecto de interés son los efectos de las replicaciones inducidas fuera del control cíclico sobre otros procesos del ciclo celular, tanto en E. coli como en otras especies bacterianas. Los resultados obtenidos permiten concluir que la replicación termoinducida no es exclusiva de "E. coli" y podemos considerar a HIR como un mecanismo de estrés generalizado en el mundo bacteriano. La medida de GFPmut2 (fluorescencia o dosis génica) es una metodología eficaz para el estudio de HIR en plásmidos; proponemos la espectrofluorimetría y la qPCR como métodos más sencillos, rápidos y precisos que la citometría de flujo y el Southern blot para la cuantificación del número de copias de plásmido.