Eficacia del análogo alquil-lisofosfolípido edelfosina en el tratamiento de la leishmaniosis, generación de resistencia y su utilidad potencial en terapia combinada

Resumen

[ES] In Vitro and In Vivo Efficacy of Ether Lipid Edelfosine against Leishmania spp. and SbVResistant Parasites En este artículo, demostramos que la edelfosina es el más potente de los ALPs para matar diferentes especies de Leishmania spp. Usando diferentes metodologías tanto in vitro como in vivo, hemos observado el potencial efecto terapéutico de este compuesto en comparación con otros ALPs, incluyendo a la miltefosina, compuesto disponible en algunos países para el tratamiento de las formas viscerales, cutáneas y mucocutáneas de la enfermedad. La miltefosina clínicamente ha mostrado diferentes índices de curación y riesgo de generar resistencia a corto plazo. Sin embargo, la edelfosina tiene mayor eficacia en este estudio, retrasando el tiempo de aparición de resistencia in vitro. En nuestro trabajo, este compuesto ocasiona la muerte del parásito por apoptosis-like; inhibiendo la proliferación celular a dosis bajas. Se ha observado también que atraviesa la membrana del macrófago y se deposita en el interior de los amastigotes, ocasionando disminución significativa de la carga parasitaria, sin intervención del óxido nítrico del macrófago. Estudios in vivo han demostrado la eficacia de edelfosina tanto en el modelo experimental murino como en el hámster, reduciendo en ambos la carga parasitaria en los animales tratados. Este efecto antiparasitario ha sido comprobado también cuando los animales se infectaron con cepas resistentes al SbV. Teniendo en cuenta nuestro estudio podemos generar la siguiente escala de actividad anti-Leishmania: edelfosina>perifosina>miltefosina>erucilfosfocolina. Nuestros resultados indican que la edelfosina es una buena alternativa para el tratamiento de la leishmaniosis y que podría utilizarse en ensayos clínicos en humanos, sobre todo en países donde existe resistencia a los antimoniales Presence of a Rac/Akt-like gene in Leishmania parasites as a putative stress response protein and therapeutic target in leishmaniasis Este estudio demuestra la existencia de una proteína de 56-kDa del tipo RAC/AKT-like, conservada en todas las especies de Leishmania spp (93-99% identidad); esta quinasa podría tener un papel importante en la supervivencia del parásito dadas las diferentes condiciones de estrés celular que experimenta durante su complejo ciclo de vida. Esta quinasa RAC/AKT-like es un posible ortólogo de la proteína AKT de humanos y de otras especies. La AKT en una quinasa de la familia de proteínas llamadas AGC evolutivamente conservadas en eucariotas; AKT está involucrada en la supervivencia de diferentes tipos de cáncer por lo tanto se considera un importante blanco de la quimioterapia. Esta quinasa forma parte de la ruta se señalización PI3K/AKT la cual controla la supervivencia, metabolismo y ciclo celular, entre otros. En parásitos, esta ruta de señalización no está caracterizada, aunque algunos estudios informáticos plantean la existencia de proteínas asociadas a ella. Para nuestra investigación, se establecieron condiciones de estrés celular, aumentando la temperatura o disminuyendo los nutrientes en el medio de cultivo. Se detectó una fosfo-señal correspondiente a una proteína de 56-KDa en los extractos proteicos. Anticuerpos específicos contra la proteína AKT de humanos reconocieron la proteína; el anticuerpo usado fue un anti-p-AKT (Thr308) y el p-AKT (Ser 473), estos dos sitios son fosfo-activados en la AKT humana para la total actividad de la proteína. En Leishmania solo observamos actividad fosfo-treonina y los análisis bionformáticos revelaron que Leishmania tiene una treonina en su motivo hidrofóbico y no una serina como en los humanos. Después de un análisis bioinformático se encontró que solo T. cruzi tiene una serina en ese motivo. El gen clonado y secuenciado en este estudio codifica una proteína de 510 aminoácidos con una identidad entre 25-26% con la humana; sin embargo, esta proteína conserva los tres típicos dominios de estas proteínas (Pleckstrin (PH), Quinasa (Ser/Thr) y AGC). Además, utilizando un inhibidor químico de la proteína AKT de humanos en el cultivo de parásitos estresados se obtiene una alta apoptosis-like a las pocas horas de su incubación en promastigotes y amastigotes. Datos boinformáticos del tipo docking insilico demuestran una posible interacción entre el inhibidor y la RAC/AKT-like. Estudios más profundos de esta quinasa podrán, desarrollar esta idea (RAC/AKT-like como diana terapéutica) The HSP90 inhibitor 17-AAG potentiates the antileishmanial activity of the ether lipid edelfosine Este artículo sugiere que la terapia combinada entre edelfosina y el antibiótico 17-AAG análogo de geldanamicina, puede ser efectivo contra la infección ocasionada por Leishmania spp. Nuestros datos, publicados previamente, han demostrado el potencial efecto terapéutico de la edelfosina en diferentes especies de Leishmania. Sin embargo, sabemos que la monoterapia tiene el riesgo de generar resistencia temprana a los medicamentos. En este estudio demostramos que el co-tratamiento con 17-AAG, un inhibidor químico de la proteína HSP90 de humanos, que está actualmente en fases de estudio clínico para el tratamiento de tumores, puede generar un efecto sinérgico con otros compuestos anti-Leishmania, ya que este compuesto demostró su capacidad de detener el ciclo celular del parásito en G0/G1, interrumpiendo así la progresión del ciclo celular del parásito. En nuestras investigaciones, cuando evaluamos la eficacia de la edelfosina in vitro contra la cepa de L. infantum, encontramos que este compuesto fue poco efectivo; sin embargo, cuando se realizó el co-tratamiento in vitro con 17-AAG se aumento el efecto apoptótico-like. Este hallazgo supone que se podría controlar el aumento de la carga parasitaria mientras se establece un tratamiento o durante el mismo, así como prevenir la aparición de clones resistentes al tratamiento