Aislamiento y caracterizacion del gen cwg2+ de schizosaccharomyces pombe

Resumen

Se han aislado varios mutantes liticos termosensibles de la levadura de fision s. Pombe dos de los cuales presentan una disminucion en el contenido en b-glucano de su pared celular y la actividad b(1-3)glucan sintasa respecto a la estirpe silvestre, denominados jcr5 y jcr10. El mutante jcr5, tambien denominado cwg2-1, presenta su defecto en la fraccion de la enzima b(1-3)glucan sintasa soluble en detergentes. Esta fraccion es la que regula la actividad y la encargada de unirse al activador gtp. El mapeo genetico de esta mutacion ha localizado el locus cwg2 en el cromosoma i en el brazo izquierdo a 34,6 cm del marcador aro5. Se ha aislado el gen cwg2+ por complementacion de la mutacion cwg2-1 con una genoteca de s. Pombe. Este gen se encuentra en una unica copia por genoma haploide y codifica para un arnm de 1,3-1,5 kb. La integracion en el genoma del gen clonado y el analisisgenetico de los integrantes demuestra que se trata del mismo gen afectado en la mutacion y no es un supresor. El analisis de la secuencia de nucleotidos del menor fragmento de adn capaz de complementar la mutacion cwg2-1 muestra una unica fase de lectura abierta de 1065 pares de bases que codifica para una proteina de 355 aminoacidos que presenta similitud con las subunidades b de las isopreniltransferasas de s. Cerevisiae.