Role of N-Ras in murine models of liver fibrosis

Resumen

Introducción Los genes Ras (H-Ras, K-Ras y N-Ras) codifican las proteínas RAS con funciones fundamentales en la regulación de la supervivencia, diferenciación, crecimiento y apoptosis celular. Aparte de sus propiedades oncogénicas, se sabe poco sobre el contexto y las funciones patofisiológicas dependientes de las células de las proteínas RAS. En particular, N-Ras participa de manera crítica en la función de las células inmunes. La fibrosis hepática se desarrolla en respuesta a citocinas inflamatorias, interacciones celulares con células inmunes y señales morfogénicas. En el presente trabajo, planteamos la hipótesis de que N-Ras juega un papel fundamental en la fisiopatología de la fibrosis hepática. Métodos Los ratones deficientes en N-Ras (N-Ras - /-) y de tipo salvaje (N-Ras +/+) criados en un fondo C57BL/6 se sometieron a la inducción de fibrosis periportal o peribiliar utilizando (i) tratamiento crónico con CCl4 y (ii) ligadura de conductos biliares (BDL), respectivamente. Se incluyeron como controles ratones inyectados con aceite y operados de forma simulada. Veintiocho días después, se sacrificaron los ratones y se recogió y analizó tejido hepático. Se realizaron exámenes histopatológicos de secciones de hígado, inmunofluorescencia (IF) e inmunohistoquímica (ICH), Western Blot y estudios en tiempo real (RT) -qPCR y análisis de matriz de genes. Resultados El examen histopatológico de secciones de hígado de ratones N-Ras-/- mostró una mayor presencia de focos necróticos asociados con marcadores significativamente elevados de daño hepático en suero en comparación con N-Ras+/+, 28 días después de CCl4 o BDL. Los hígados N-Ras-/- mostraron un aumento de la muerte celular y marcadores de proliferación celular compensatoria, como PCNA y Ki-67. Además, las células F4-80+ y CD45+ aumentaron significativamente en los animales N-Ras-/- en comparación con los animales N-Ras+/+. Además, la deposición de colágeno I y III y la expresión de ARNm y proteína de ¿-actina de músculo liso (¿SMA) se elevaron significativamente en ratones N-Ras-/-. Mecánicamente, los hígados N-Ras-/- mostraron una activación aumentada de la caspasa 8 escindida (CC8), la serina / treonina quinasa que interactúa con el receptor fosforilado 1/3 (pRIPK1/3) y el dominio de quinasa de linaje mixto fosforilado como la pseudoquinasa (pMLKL), junto con una disminución Caspasa-3 escindida. Además, la deficiencia de N-Ras desencadenó la sobreexpresión de serina / treonina-proteína quinasa fosforilada (pAKT) y quinasas N-terminales c-Jun fosforiladas 1/2 (pJNK1/2). Finalmente, el análisis de la matriz de genes mostró que N-Ras juega un papel fundamental en la modulación de la fibrosis. Conclusiones Tras el tratamiento crónico con CCl4 o BDL, la deficiencia de N-Ras se asoció con un aumento de la muerte celular escindida de caspasa 8, RIPK1/3 y pMLKL, una proliferación compensadora exacerbada, un aumento de la inflamación y la infiltración de células inmunitarias y, en última instancia, fibrosis hepática. Estos hallazgos indican que N-Ras podría desempeñar un papel fundamental en el inicio y progresión de la fibrosis hepática. Además, sugieren que la modulación de la señalización de N-Ras podría ser un nuevo enfoque terapéutico para el tratamiento de la lesión hepática crónica.