Estudio de las relaciones estructura-función en toxinas proteicas de "aspergillus"secreción y actividad ribonucleolítica

Resumen

La alfa-sarcina es la más conocida de la familia de las ribotoxinas fúngicas, proteínas citotóxicas secretadas por hongos filamentosos, que presentan una exquisita especificidad de sustrato por un solo enlace del ribosoma, a la vez que la capacidad intrínseca de atravesar membranas celulares. Son proteínas que se habrían especializado por evolución a partir de un gen de la familia de las ribonucleasas microbianas extracelulares, menos específicas y no citotóxicas, como la rebonucleasa T1. Se ha estudiado la presencia de ribotoxinas en varios hongos del género Aspergillus y otros relacionados, concluyéndose que la ribotoxinas están más extendidas entre los hongos filamentosos de lo que se creía hasta ahora. También se ha estudiado la relación filogenética entre ellas. Asimismo, se ha encontrado un posible intermedio evolutivo en la hirsutelina. A, al comparar sus estructura primaria. Se han estudiado los mecanismo de producción y secreciónd e toxinas en Aspergillus, tanto en el propio hongo, A.giganteus, como en la levadura Pichia pastoris, tomando como modelos la alga-sarcina y otra proteína citotóxica, la llamada proteína antifúngica (AFP), que se ha caracterizado en detalle. Se han dilucidado los pasos que se dan en el procesamiento protelítico de los precursores, estudiando más en detalle la eficiencia de la secuencia señal,y la especificidad del corte por la proproteína convetasa homóloga a la kexina (Kex2p). Se ha estudiado el mecanismo catalítico de la alfa-sarcina, estableciéndose que es una ribonucleasa ciclante ácida,y los papeles que ejercen los reiduso catalíticos en la transfosforilación: la His 137 es el ácido general, y el Glu 96 la base general. Asimismo, se han conseguido sistemas de producción recombinante, en Escherichia coli y en P.Pastoris, tanto para la altafa-sarcina como para la ribonucleasa U2. Esta última es la ribonucleasa no citotóxica más parecida a las robotoxinas y se