Efecto del butirato sobre células de adenocarcinoma de colon humanoobtención y caracterización de células resistentes a butirato

Resumen

El butirato, sustrato energético del epitelio del colon, regulan múltiples procesos celulares y se ha descrito como un posible agente terapéutico frente al cáncer colorrectal. Así, en esta memoria se describe los efectos de este agente sobre la línea celular BCS-TC2 de adenocarcinoma de colon humano. El butirato induce diferenciación terminal en estas celulas, provocando cambios morfologicos e incrementando la actividad de fosfatasa alcalina. La subsiguiente inducción de apoptosis, conlleva alteraciones en el potencial de membrana, en la producción de especies reactivas de oxigeno y en la actividad de la caspasa 3. Sin embargo, el tratamiento continuado con butirato 2mM ha permitido seleccionar subpoblaciones celulares que escapan a estos efectos y se ha podido establecer en cultivo la sublinea celular BCS-TC2.BR2. Una vez establecida, se describe su caracterización, así como las posibles causas de resistencia a la apoptosis. El grado de diferenciación de estas celulas es superior al de las celulas parentales y a diferencia de estas, son poco sensibles a los efectos apoptoticos del butirato, sugiriendo la existencia de un bloqueo en un etapa previa a la activación de caspasa 3. La resistencia a butirato parece, además, que no es de carácter reversible. Por otra parte, ambos tipo de celulas son capaces de proliferar como esferoides, aunque, en estas condiciones, el butirato induce menor grado de diferenciación. Sin embargo, a diferencia de las celulas parentales, las celulas BCS-TC2.BR2 tiene capacidad tumorigenica, lo que no se correlaciona con diferencias muy significativas en los niveles de MMP-2,MMP-9 y estromelisina 3,siendo estas dos ultimas inducibles por butiraro. La resistencia de las celulas BCS-TC2.BR2 no es especifica de butirato sino que es de carácter más general como muestran los estudios de eliminación de glucosa y estrés térmico. Estos estudios parecen sugerir que la expresión de GLUTs y HSPs podrían estar relacionadas con la mayor resistencia y con la capacidad tumorigenica. Finalmente, los análisis proteomicos realizados han permitido contar con una visión general de las proteínas modificadas entre ambas líneas celulares que podrían estar implicadas en la adquisición de resistencia a apoptosis