Estudio comparativo y evaluación de diferentes técnicas cromatográficas en el análisis de residuos de corticosteroides en muestras biológicas

Résumé

Se evalúa el comportamiento cromatográfico de los corticosteroides y se optimizan las condiciones adecuadas para la extracción y purificación en muestras biológicas. Se comparan distintos cartuchos de extracción por fase sólida (C18, Sílica, OASIS, Bond Elut) con diferentes condiciones de lavado y elución. Los mejores resultados se obtuvieron con cartuchos OASIS con recuperaciones por encima del 90%. Se realizó un estudio del disolvente con el cual se extraen mejor los corticosteroides, siendo el éter dietílico para pH 3 y 7 y el acetato de etilo para pH 11. Se llevo a cabo un estudio de separación de los corticosteroides en diferentes columnas cromatográficas con variaciones en el pH, temperatura, composición de la fase móvil, etc, evaluando los Tr en función del Tr de la dexametasona. Los mejores resultados se obtuvieron con una columna Phenomenex Synergi Max RP 80A C12 a 40ºC y con una columna NovaPak C18 (4.6 x 250mm) 4 mm, con una fase móvil compuesta por acetonitrilo/agua (30/70),.El tiempo de incubación de orinas, hígado y riñón para la deconjugación de los corticosteroides se optimizó en 24 horas para orina y 4 horas para tejidos, a pH 4.8 y a una temperatura de 37ºC ± 2ºC. Esta hidrólisis se realiza con la enzima Helix Pomatia. Los resultados de este estudio pueden ser aplicados al desarrollo de métodos analíticos. Se optimizaron técnicas de detección como son HPTLC como método criba, HPLC y GC-MS como método de confirmación para la detección de los corticosteroides. Para GC-MS se desarrolló un método de detección que incluye una derivatización con clorocromatopiridina. La detección, identificación y cuantificación de los residuos de los corticosteroides, se llevó a cabo con GC-MS en modo NCI, permitiendo la determinación de los corticosteroides a niveles de 0.2 ppb para orina y 1 ppb para hígado y riñón.