Análisis funcional de formas mutadas de la proteína de movimiento del virus del mosaico del pepino expresadas constitutivamente en plantas de "nicotiana tabacum"

Resumo

Con objeto de profundizar en el conocimiento de la proteína 3a del virus del mosaico del pepino (CMV) y explorar la posibilidad de utilizarla como un sistema de control de las virosis, el presente trabajo se ha centrado en la caracterización funcional de una serie de mutantes de delección de p3a, así como en el análisis de su capacidad para conferir resistencia a plantas de tabaco cuando son expresadas constitutivamente. El análisis funcional de los mutantes mostró que algunos de ellos mantienen su actividad, restaurando los movimientos a corta y larga distancia de un virus defectivo para esta funicón (mutantes M2 y M8) o tan sólo a corta distancia (mutante M9), indicando que los dominios aminoácidicos 134-143; 193-203 y 204-213 de la proteína son dispensables para el transporte viral. Por el contrario, los dominios ubicados entre los aminoácidos 144-153 (mutante M3); y 164-183 (mutantes M5 y M6) son requeridos para su actividad. Por otro lado, el estudio del efecto de su expresión constitutiva en plantas de tabaco sobre la infección del virus homólogo mostró que la expresión de las dos proteínas funcionales para ambos movimientos incrementan la susceptibilidad de la planta a la infección. Así, detectamos un aumento transitorio de la carga viral y a veces, de la intensidad de los síntomas. Por el contrario, la expresión de los otros transgenes protege a la planta frente a la infección, manifestándose en una caída de la acumulación viral en las hojas inoculadas, que puede ir acompañada de una inhibición de la invasión sistémica. La eficacia de la protección depende del transgén. Finalmente, la expresión del transgén M10, que codificaría para un péptido de 46 aa correspondiente a la región N terminal de la proteína, bloquea la dispersión sistémica del virus homólogo.