Análisis e identificación de proteínas implicadas en la biosíntesis de la pared celular de "Saccharomyces cerevisiae"caracterización del gen "PST1"

Resumen

La pared celular fúngida es una estructura dinámica situada entre la membrana plasmática y el medio extracelular, que resulta esencial para el mantenimiento de la integridad celular. Dado que esta estructura no existe en células eucariotas superiores, un conocimiento más profundo de la misma podría conducir el desarrollo de nuevos agentes antifúngicos de acción selectiva. La estrategia empleada en este trabajo para el estudio de proteínas implicadas en procesos relacionados con la pared celular ha sido el análisis de las proteínas secretadas por protoplastos de Saccharomyces cerevisiae en condiciones de regeneración en medio liquido. La eliminación de la pared celular de las células de levadura en un medio isosmótico y posterior incubación de los protoplastos en condiciones de regenaración permite la expresión de genes implicados en los procesos de construcción de la pared celular. En estas condiciones, numerosas proteínas, entre las que se incluyen proteínas estructurales de la pared celular así como enzimas implicadas en los procesos de construcción y ensamblaje de la misma, son secretadas al medio de cultivo. Las proteínas secretadas por protoplastos de S. Cerevisiae han sido analizadas mediante electroforesis bidimensional, realizándose el isoelectroenfoque en un gradiente de pH inmovilizado. Las manchas proteicas detectadas fueron indentificadas mediante secuenciación aminoterminal, detección con anticuerpos específicos o espectrometría de masas. El trabajo se engloba pues dentro de una disciplina surgida recientemente, a la que se ha dado en llamar Proteómica, que consiste en el estudio en gran escala de los productos génicos de un genoma con el fin de obtener una visión global e integrada de los procesos celulares. Las proteínas identificadas en ese trabajo pueden ser englobadas en distintas categorías de acuerdo a su función biológica. Así, se han identificado proteínas de pared celular propiamente dichas o implicadas en su construcción, enzimas glucolíticas y de la fermentación, proteínas de choque térmico, y otras proteínas relacionadas con funciones diversas. Asímismo se han identificado varias proteínas de función hasta el momento desconocida. Una de las proteínas de función desconocida detectadas, codificada por el gen PST1(de Protoplasts-Secreted), presenta en su secuencia aminoacídica características típicas de proteínas de pared celular. La segunda, parte de esta Memoria expone la caracterización funcional de dicho gen, implicado en la construcción de la pared celular en S. Cerevisiae. Por otra parte, en el presente trabajo se demuestra por primera vez genéticamente que dos enzimas glucolíticas son capaces de dirigir la salida de un péptido intracelular a la superficie celular, apoyando por tanto su identificación entre las proteínas secretadas por protoplastos, y su presencia en la pared celular de esta levadura