Regulación mitocondrial de los canales de Ca2+ CRAC en linfocitos T

Resum

La entrada de Ca2+ al interior celular es la señal necesaria para que se produzca la activación del linfocito T. Esta entrada de Ca2+, denominada ICRAC (Ca2+ release activated Ca2+ current) ocurre tras el vaciado de los depósitos intracelulares mediado por IP3, generado tras el reconocimiento del antígeno por el receptor de la célula T (TCR). Los canales CRAC se inactivan de manera dependiente de la concentración de Ca2+ intracelular, por lo que cualquier orgánulo, sistema de transporte o metabolitos capaces de regular la concentración intracelular de Ca2+ podrían, en principio, modular también la actividad de los canales CRAC. Para llevar a cabo el objetivo de este trabajo se ha utilizado la técnica electrofisiológica de patch-clamp en célula única para estudiar los mecanismos implicados en la regulación de la actividad de las corrientes de Ca2+ a través de canales CRAC, además se han utilizado técnicas de imagen de microscopía de fluorescencia y de citometría de flujo para estudiar la distribución y la capacidad funcional de las mitocondrias en la línea celular Jurkat de linfocitos T humanos. Nuestros resultados muestran que las propiedades cinéticas de diferentes quelantes de Ca2+ determinan la extensión y amplitud de los microdominios de Ca2+ que se generan alrededor de los canales CRAC y por tanto, de la inactivación de ICRAC. Además, el uso de sustratos de la respiración mitocondrial y de distintos fármacos que modifican la actividad mitocondrial, nos han permitido demostrar que el ATP liberado por mitocondrias metabólicamente activas y cercanas a la membrana plasmática actúa principalmente como quelante de Ca2+ reduciendo la extensión de la inactivación de ICRAC en linfocitos T Jurkat. Asimismo, la transfección con proteínas fluorescentes dirigidas específicamente a las mitocondrias y su análisis mediante microscopía de fluorescencia confocal revelaron la existencia de mitocondrias próximas a la membrana plasmática, lo cual es congruente con el papel propuest