Estudio molecular de los factores de virulencia y de la resistencia a claritromicina en la infección por "Helicobacter pylori"

Resumen

La infección por Helicobacter pylori es una de las más comunes en el hombre. H. pylori es un bacilo gramnegativo, que se encuentra en la mucosa gástrica del estómago humano asociado a diferentes enfermedades digestivas. Cuando H. pylori coloniza la mucosa gástrica produce una gastritis superficial que puede permanecer así durante toda la vida o bien, al cabo de los años desarrollar una úlcera péptica o una gastritis atrófica que podría ser el primer paso para la evolución a cáncer gástrico. Los factores de patogenicidad de la propia bacteria pueden tener su efecto en el desarrollo de la enfermedad. Las pautas de tratamiento para erradicar H. pylori combinan 2 o 3 antimicrobianos junto con un compuesto anti-ulceroso. Uno de los antimicrobian os más utilizados es la claritromicina, pero la infección por cepas resistentes a este antimicrobiano reduce de forma importante el éxito del tratamiento. Objetivos: 1. Detectar la presencia de H. pylori en muestras de biopsias gástricas mediante métodos moleculares, utilizando la PCR en tiempo real y PCR convencional con posterior hibridación. 2. Comparar la sensibilidad a claritromicina y la mutación responsable de la resistencia a este antibiótico en aislamientos clínicos de H. pylori en el año 1994 y 2008. 3. Conocer la prevalencia de diferentes genes asociados a la virulencia en los aislamientos clínicos del año 1994 y 2008: gen vacA (alelos s y m) y gen cagA (EPIYA ¿motifs¿). 4. Estudiar la presencia de genes informativos de la proc edencia geográfica de las cepas en el año 1994. Material y métodos: Todas las muestras estudiadas procedían de pacientes sintomáticos y fueron recibidas en el Departamento de Microbiología del Hospital Universitario La Princesa. Las muestras fueron procesadas siguiendo la metodología habitual para el cultivo. La extracción de DNA se realizó mediante el sistema automático Nuclisens easyMAG (BioMérieux, Lyon, Francia). Se estudiaron 106 muestras de biopsias gástricas mediante el kit MutaREAL® Hel icobacter pylori para detectar la presencia de H. pylori y su resistencia a claritromcina, se basa en una amplificación del gen 23S ARNr de H. pylori y la subsiguiente detección de mutantes mediante la hibridación con sondas y el análisis de la curva de la temperatura de fusión de los productos amplificados. Se estudiaron 61 muestras de biopsias gástricas mediante el kit comercial Genotype®HelicoDR que consiste en una amplificación seguida de una hibridación del producto amplificado con sondas...