Caracterización y modulación de la inflamación peritoneal para limitar la fibrosis causada por el líquido de diálisismodelo en ratón

Resumen

Desarrollamos un modelo en ratón de exposición de la membrana peritoneal (MP) al líquidos de diálisis (LD), que nos ha permitido confirmar los hallazgos observados en humanos, y analizar la secuencia de fenómenos que suceden a lo largo del tiempo. Observamos una inflamación crónica aséptica mantenida en la cavidad peritoneal, que implica la producción de citoquinas y quimioquinas a la cavidad peritoneal a lo largo del proceso. Además, existe un aumento paulatino de la celularidad en el efluente. Entre las células drenadas, los linfocitos B disminuyen desde las etapas iniciales y los T aumentan. El mayor incremento lo experimentan los macrófagos. Además, aumentan MCP-1 y GM-CSF, implicadas en la atracción y activación de monocitos y la proliferación y diferenciación de progenitores de granulocitos/macrófagos. Esta inflamación influye en la aparición de fibrosis, transición epitelio-mesenquimal de las células mesoteliales, reclutamiento celular, neovascularización y activación de fibroblastos residentes, así como aparición de nuevas células fibroblastoides. Esto genera alteraciones en la capacidad de ultrafiltración (UF) de la MP y un engrosamiento con el tiempo debido, por una parte, a un aumento de matriz, y por otra, a un acúmulo de células de origen hematopoyético (CD45+) adheridas a la MP. Estas células CD45+ coexpresan FSP-1, marcador de fibroblastos. Esto significa que estas células están jugando un papel relevante en la generación de matriz y aparición de fibrosis en nuestro modelo. Un factor importante en la feneración de inflamación aséptica es la presencia de GDPs en el LD. Comprobamos que el tratamiento con LD pobre en GDPs genera una menor inflamación caracterizada por la disminución de macrófagos. Estos datos muestran la implicación de una inflamación crónica causada por los LD en el daño a la MP, por lo que decidimos actuar sobre la inflamación mediante un agente antiinflamatorio, Celecoxib, y un modulador de inflamación: Paricalcitol. La enzima ciclooxigenasa (COX) es diana de drogas antiinflamatorias y tiene dos isoformas: COX-1 (constitutiva) y COX-2 (inducida en condiciones patológicas)7. El Celecoxib inhibe específicamente COX-2. Los resultados muestran que el Celecoxib genera menor grosor de MP y protege la UF. Además, el número total de células drenadas disminuye, principalmente los macrófagos. Por otra parte, el Paricalcitol es un análogo de la forma activa de la vitamina D, la cual tiene efecto inmunorregulador y fibroprotector. El grupo con Paricalcitol presenta menor grosor de MP y una cierta recuperación de la capacidad de UF frente al tratado sólo con LD. Además, la IL-17 disminuye, y aumenta el número de células T CD8+ que expresan un fenotipo T regulador. Se ha descrito que las células secretoras de IL-17 y las T reguladoras pueden tener un precursor común. Paricalcitol podría actuar estimulando la diferenciación de éste precursor hacia un fenotipo T regulador. Estos resultados demuestran que la regulación de la actividad inflamatoria generada por los LD permitirá disminuir las complicaciones que se producen como consecuencia de los tratamientos de DP. [ABSTRACT]We developed a mouse model of peritoneal membrane (PM) exposure to dialysis fluids (PDF), which allowed us to confirm these findings in humans, and analyze the sequence of events that happens along time. We observed a constant aseptic chronic inflammation in the peritoneal cavity, which involves the production of cytokines and chemokines by both resident cells in the PM as those that are recruited to the peritoneal cavity during the process. Among drained cells, B cells decreased from the initial stages and T increased. The biggest increase was experienced by macrophages. Furthermore, increased MCP-1 and GM-CSF, involved in the attraction and activation of monocytes and the proliferation and differentiation of progenitors of granulocytes / macrophages. This inflammation affects the development of fibrosis, epithelial-mesenchymal transition of mesothelial cells, cell recruitment, neovascularization and activation of resident fibroblasts and new appearance of fibroblastoid cells. This generates changes in the ability of ultrafiltration (UF) of PM and thickening with time due, in part, to increased matrix, and the other to an accumulation of cells of hematopoietic origin (CD45 +) attached to the PM. In this regard, CD45 + cells infiltrated into the tissue also coexpress and FSP-1, a marker of fibroblasts. This means that these cells are playing an important role in the generation of matrix and development of fibrosis in our model. An important factor implicated in the generation of an aseptic inflammation is the presence of GDPs in the PDF. We show that the treatment with low-GDPs PDF generates a lower inflammatory reaction, characterized by a reduction of macrophages. These data show the involvement of chronic inflammation caused by PDF on damage to the PM, so we decided to act on inflammation by anti-inflammatory drug, Celecoxib, and a modulator of inflammation: Paricalcitol. The enzyme cyclooxygenase (COX) is a target of anti-inflammatory drugs and has two isoforms: COX-1 (constitutive) and COX-2 (induced in pathological conditions). Celecoxib specifically inhibits COX-2. The results show that celecoxib produces less thick and protects the UF PM. In addition, the total number of drained cells decreases, mainly macrophages. Furthermore, Paricalcitol is an analog of the active form of vitamin D, which has immunomodulatory and fibroprotector effects. The paricalcitol group showed less thickness of MP and a recovery of UF capacity. In addition, IL-17 decreases and increases the number of CD8 + T cells that express a T regulatory phenotype. It has been described that IL-17 secreting cells and T regulatory cells may have a common precursor. Paricalcitol may act stimulating the differentiation of this precursor to a T regulatory phenotype.