Papel del ectodominio de la proteína E2 del virus de la hepatitis C en la unión y entrada del virus en la célula

Resumen

PAPEL DEL ECTODOMINIO DE LA PROTEÍNA E2 DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C EN LA UNIÓN Y ENTRADA DEL VIRUS EN LA CÉLULA El virus de la Hepatitis C (HCV) afecta a unos 170 millones de personas en el mundo, siendo la causa principal de hepatitis aguda y crón ica, incluyendo cirrosis y cáncer hepático. En la actualidad no se dispone de una vacuna eficaz frente a este virus y el tratamiento disponible es muy costoso para la mayoría de las personas en los países no desarrollados, además de ser muy prolongad o y causar serios efectos secundarios. El HCV es un virus con envoltura, ARN positivo, que pertenece al género Hepacivirus dentro de la familia Flaviviridae. Las glicoproteínas de su envoltura, E1 y E2, son las responsables de la unión del virus a la superficie de la célula y de inducir la fusión entre las membranas viral y celular, pero la falta de datos estructurales acerca de estas proteínas ha dificultado el estudio de los mecanismos moleculares que conciernen a las primeras etapas del ciclo infectivo del virus. Con base en potenciales homologías estructurales con proteínas de alfa y flavivirus, se ha propuesto que E2 es una proteína de fusión tipo II, siendo E1 la proteína acompañante. Con el fin de obtener información acerca de la lo calización de las regiones fusogénicas en el ectodominio de E2, E2661, comprendiendo los residuos 384 a 661 de la poliproteína, se eliminaron diferentes regiones con tendencia a insertarse en la membrana. Dichos mutantes fueron obtenidos empleando el sistema de expresión de baculovirus-células de insecto y purificados mediante cromatografía de afinidad con un elevado rendimiento y pureza. Su caracterización estructural reveló que los residuos 502-520 de E2661 son relevantes en el mantenimiento d e la estructura tridimensional, mientras que el resto de las deleciones no produjo variaciones estructurales importantes en la proteína. El estudio de las propiedades fusogénicas de los mutantes que conservan la estructura tridimensional de E2661 mos tró que la eliminación conjunta de las regiones de aminoácidos 430-449, 543-560 y 603-624, conduce a una fusión incompleta de vesículas de fosfatidilglicerol (PG) a pH 5.0, mientras que la eliminación de cada una de estas regiones por separado apenas produce efectos en las propiedades fusogénicas de la proteína E2. Asimismo, se construyó un mutante formado por el ectodominio de E2 con las tres regiones anteriores delecionadas, unido por una secuencia espaciadora flexible de 21 aminoácidos al ec