Estudios de inmunidad y eficacia de la vacunación experimental con ADN y MVA recombinantes que expresan antígenos del virus de la fiebre del Valle del Rift

Resumen

La fiebre del Valle del Rift (RVF) es una enfermedad zoonótica que afecta a rumiantes y al hombre, transmitida principalmente mediante mosquitos. El virus de la fiebre del Valle del Rift (RVFV) está clasificado dentro de la familia Bunyaviridae, género Phlebovirus. Actualmente, la enfermedad es endémica en el África sub-sahariana, Egipto y Arabia Saudí, con riesgo de introducción a zonas libres de esta enfermedad con consecuencias impredecibles para la salud pública y animal.Las vacunas disponibles basadas en virus atenuados y/o inactivados presentan efectos adversos, no existiendo vacunas aprobadas para su uso en el hombre o en el ganado en países no endémicos. Ante esta situación, diferentes laboratorios están trabajando en el desarrollo de una vacuna segura, económica, de uso humano y veterinario, capaz de inducir una respuesta inmune rápida y duradera.El objetivo principal de esta tesis ha sido la evaluación de vacunas seguras basadas en plásmidos ADN y el vector viral MVA expresando antígenos del RVFV, tanto en el modelo murino como ovino.En primer lugar, se construyeron los vectores virales MVA recombinantes codificando las glicoproteínas Gn y Gc (MVA-GnGc), y la nucleoproteína N (MVA-N) del RVFV, y se confirmó la correcta inserción genética y expresión de las proteínas de interés.A continuación, se analizó la respuesta inmune y la protección inducida por diferentes estrategias vacunales en un modelo de infección experimental de ratones BALB/c. La protección obtenida con dos dosis de ADN codificando las glicoproteínas Gn y Gc del RVFV (pCMV-M4) fue elevada tras el desafío con la cepa virulenta RVFV 56/74, relacionada con la inducción de una respuesta inmune tanto humoral como celular. La vacunación heteróloga basada en un primado con ADN y recuerdo con MVA (pCMV-M4 + MVA-GnGc) disminuyó la morbilidad con respecto a la vacunación homóloga de ADN, correlacionado con un incremento en la respuesta celular. A su vez, una dosis de MVA-GnGc confería una protección completa y esterilizante tras el desafío, estando dicha protección mediada por una potente inmunidad celular en ausencia de anticuerpos neutralizantes y dependiente de una respuesta funcional al IFN de tipo I.Asimismo, se han identificado tres epítopos MHC de clase I en ratones BALB/c, uno perteneciente a la glicoproteína Gn y dos correspondientes a la glicoproteína Gc del RVFV, capaces de estimular de forma específica la secreción de IFN- en una población de linfocitos T CD8+.Además, se ha demostrado que la estrategia vacunal basada en el vector MVA codificando la glicoproteína Gc del RVFV induce una respuesta celular específica en ausencia de anticuerpos neutralizantes, suficiente para inducir niveles de protección elevados en el modelo de ratón BALB/c.Por otro lado, la inmunización con dos dosis de la vacuna ADN codificando la nucleoproteína N del RVFV (pCMV-N) confería una protección parcial en ratones BALB/c tras el desafío viral mediada por una potente respuesta de anticuerpos. La estrategia vacunal heteróloga ADN/MVA codificando la nucleoproteína N incrementaba la respuesta humoral con respecto al empleo de dos dosis de ADN, sin mejorar los datos en cuanto a protección. Por último, la vacunación con una dosis de MVA-N no fue capaz de inducir una respuesta inmune protectora tras el desafío. Con respecto al estudio de la respuesta celular, ninguno de los péptidos de la nucleoproteína N seleccionados mediante predicción bioinformática fueron capaces de estimular la secreción de IFN- en estos ensayos.Con estos datos, se concluyó que la vacuna MVA-GnGc podía ser considerada un candidato vacunal potencial para uso veterinario frente al RVFV. Para ello, se llevó a cabo un ensayo de inmunización en ovejas donde una dosis de MVA-GnGc controlaba parcialmente la infección por el RVFV en cuanto a la duración de la viremia y secreción viral, e inducía un efecto de primado en la respuesta de anticuerpos neutralizantes tras el desafío con respecto a los grupos control.