Desarrollo de métodos alternativos de valoración y criopreservación seminal en el delfín mular ("Tursiops truncatus")

Resumen

La pérdida de biodiversidad es un proceso que se ha agravado de manera alarmante en los últimos años. Con el fin de frenar este problema se han desarrollado programas de conservación de la biodiversidad que incluyen la instauración de Bancos de Recursos Zoogenéticos así como la reproducción asistida. El objetivo de esta tesis doctoral es mejorar el conocimiento sobre la fisiología reproductiva en esta especie así como establecer métodos alternativos de evaluación de la calidad espermática y de congelación seminal.En el Capítulo I se describe la puesta a punto de un método eficaz de congelación comparando dos concentraciones de crioprotector así como la eficacia de un diluyente libre de proteínas animales y por último la puesta a punto de técnicas de valoración seminal objetivas. En el Experimento 1se observó que una concentración final de glicerol del 3 por ciento es suficiente para asegurar una protección eficaz del espermatozoide en esta especie. En este estudio se demostró que el LP1 a base de sículaslipídicas actúa de manera similar o superior a los diluyentes a base de yema de huevo. Teniendo en cuenta que además por la composición del diluyente LP1 se evitan contaminaciones por patógenos de origen animal constituye una excelente alternativa al uso de proteínas animales desde un punto de vista sanitario en el delfín mular. En el Experimento 2 se demostró que la evaluación de la actividad mitocondrial empleando el fluorocromo Mitotracker Deep Red es un parámetro de calidad espermática fiable en esta especie. . Esto resulta especialmente útil e interesante en especies en peligro o de difícil acceso.En el Capítulo II, se mostró que el ensayo SCD puede llevarse a cabo tanto en condiciones de campo como en el laboratorio con modificaciones menores en el protocolo estándar lo que ofrece información fiable sobre el daño de ADN espermático en los delfines abriendo nuevas posibilidades para la evaluación de la fragmentación de ADN espermático en otras especies salvajes de difícil acceso. En el Experimento 2 inmediatamente después de la colecta los espermatozoides mostraron niveles de fragmentación basales, y se mantuvieron así hasta un máximo de 48h Inmediatamente después de la descongelación no se observaron diferencias en la fragmentación entre semen fresco y descongelado con los diferentes diluyentes. En los espermatozoides descongelados se observó un aumento en la tasa de fragmentación a las 24h. No se encontró correlación entre ninguno de los parámetros de calidad seminal y la agmentación de ADN espermático tanto en muestras frescas o descongeladas. Los bajos niveles de fragmentación espermática encontrados en este estudio podrían estar relacionados con la competencia espermática y asociar las especies polígamas con una baja tasa de fragmentación espermática. En el Capítulo III se estudió la organización del material genético en esta especie comparándola con otra especie no competidora. Además se realizaron experimentos de fecundación in vitro FIV heteróloga. En el Experimento 1 se realizó la FIV emplearon ovocitos bovinos con la zona pelúcida intacta y rmatozoides descongelados de delfín o de bovino. Los espermatozoides de delfín fueron capaces de penetrar ovocitos de bovino lo que lleva a la formación pronuclear y a la división del embrión híbrido. No se observaron ovocitos polispérmicos en el grupo de la FIV heteróloga. La tasa de división a día 2 en el grupo de FIV heteróloga fue de 34 por ciento mientras que en el grupo de FIV homóloga se obtuvo una tasa del 89,3por ciento. La presencia de material genético de delfín mular en los embriones híbridos se confirmó por PCR. En el Experimento 2 se realizó la FIV empleando ovocitos murinos con la zona pelúcida intacta y espermatozoides homólogos o de delfín mular.