Respuesta al estrés catiónico en "Aspergillus nidulans"estudio del proceso de señalización del factor transcripcional SltA

Résumé

Esta tesis doctoral se ha enfocado al estudio del proceso de señalización del factor transcripcional SltA del organismo modelo Aspergillus nidulans, que media la respuesta a estrés por determinados cationes y la alcalinización del medio. Para ello se han abordado tres objetivos principales, el análisis de su mecanismo de activación y regulación, la caracterización de la proteína señalizadora SltB y la relación funcional entre ambas.SltA pertenece a la clase de factores de transcripción con dedos de zinc como dominio de unión a DNA. Su distribución filogenética está restringida a los genomas de hongos filamentosos. En A. nidulans la respuesta a pH ambiental está regulada además por los factores de transcripción PacC y CrzA, también con dedos de zinc. En S. cerevisiae Crz1p está involucrado en la regulación de los cationes intracelulares, pero en A. nidulans esta función se reparte entre SltA y CrzA. SltA debe ser activado mediante proteólisis generándose en la célula al menos dos formas funcionales y la proteína SltB es determinante en este proceso.Mediante diversas estrategias de genética clásica y biología molecular se han generado formas mutantes etiquetadas de SltA y SltB para investigar la base molecular del mecanismo de activación y en la regulación postraduccional por proteólisis de ambas proteínas. La forma primaria de traducción del factor transcripcional SltA se ha denominado SltA78kDa. La forma truncada se denomina SltA32kDa y está en equilibrio con una forma modificada por fosforilación de la misma. La proteína señalizadora SltB está divida en dos dominios cuya función ha sido definida in silico y mediante análisis genético clásico, un dominio pseudoquinasa y un dominio proteasa. El dominio pseudoquinasa es esencial para que se produzca la proteólisis de SltA, pero no está implicado en su fosforilación. El dominio proteasa se ha clasificado como una endoproteasa del tipo serina, y es responsable de la auto-proteólisis de la propia proteína SltB, requisito previo para que se produzca el corte proteolítico de SltA.Finalmente, estudios de expresión de los genes sltA y sltB han permitido asignar una función positiva de SltA sobre la expresión de SltB, lo que demuestra que la forma nativa SltA78kDa es funcional.Esta tesis doctoral supone el comienzo del estudio de un nuevo sistema de regulación por pH alcalino y determinados cationes en A. nidulans.Palabras clave: Aspergillus nidulans, factor transcripcional, estrés abiótico, proteólisis