Caracterización de la señalización inside-out implicada en la regulación de la adhesión de Linfocitos T dependiente de la integrina VLA-4

Resumen

La integrina VLA-4 (alfa4beta1) es una molécula de adhesión esencial en la migración de linfocitos T desde el compartimento sanguíneo hacia el interior de los tejidos. La estimulación de linfocitos T con quimioquinas genera una señalización inside out que se traduce en un aumento rápido y transitorio de la actividad de alfa4beta1. La interacción de proteínas activadoras con los dominios citoplasmáticos de las subunidades beta, se traduce en un incremento de la afinidad de alfa4beta1 por sus ligandos y un posterior reforzamiento de la adhesión. Un componente esencial de la señalización inside out que regula la activación de VLA-4 es la proteína Vav1, siendo razonable proponer que proteínas que se asocian a Vav1 podrían modular dicha adhesión. Así, las dinámicas de asociación entre Vav1, SLP76 y ADAP podrían regular la adhesión mediada por alfa4beta1 en linfocitos T. SLP76 y ADAP funcionan como adaptadores que optimizan la activación de Rac, así como la adhesión y spreading celular. Asimismo SKAP1 modula la etapa de reforzamiento de la adhesión y tienen un papel represor en la activación de Rac y RhoA, mostrando una mayor activación de dichas GTPasas y pMLC en células T SKAP1 KO, lo cual podría estimular la migración linfocitaria. Por otro lado ICAP1 juega un papel importante en las primeras etapas de la adhesión, regulando negativamente la activación de VLA-4. Nuestros experimentos preliminares no muestran claras evidencias de competición entre talina y kindlin3 con ICAP-1 en la asociación con la subunidad beta1. Por último, hemos estudiado la difusión en membrana de las integrinas beta1 en presencia de CXCL12, lo cual mostró una reducción de la población móvil. El estudio del clustering en membrana tras distintos estímulos mostró una tendencia a la adquisición de la conformación activa de integrinas VLA-4 y una disminución de la distancia entre clusters.