Regulación de la expresión de CD69 y sus efectos funcionales

Resumen

CD69 es un receptor de membrana inducible expresado en leucocitos, considerado en general como marcador de activación. En linfocitos se induce su expresión en pocas horas, como en linfocitos T tras estimulación con PMA, mientras que en células mieloides alcanza su máximo de expresión en alrededor de 24 horas. Esta regulación específica de su expresión en diferentes poblaciones de leucocitos se puede atribuir a la acción de distintos elementos reguladores de la transcripción situados en cis respecto al gen de CD69, previamente descritos como el promotor y las zonas conservadas no codificantes CNS1, CNS2, CNS3 y CNS4. Se observaron también procesos de regulación de la expresión de CD69 post-transcripcionales, por la acción de los micro-RNAs miR-130 301 y miR-181 y mediante la interacción con el receptor S1P1. Esta compleja regulación de su expresión lleva implícita además una complejidad funcional de la que existen evidencias en diferentes aspectos, como en la estimulación y regulación del sistema inmune y en la migración de leucocitos, sin haberse llegado aún a una conclusión concreta sobre su función biológica. En esta tesis se profundiza en el conocimiento de la relación entre la regulación de la expresión y la función de la molécula CD69. Para ello, en primer lugar se analizó en detalle la función amplificadora de la actividad transcripcional del promotor de CD69 a través de la región conservada CNS2. Mediante ensayos de luciferasa se ha descrito un núcleo mínimo responsable de la mayor parte de la actividad de CNS2. Gracias a herramientas informáticas de predicción y de bases de datos experimentales, se localizaron sitios conservados de unión de factores de transcripción en el núcleo de CNS2 y se confirmó que ésta era la región más relevante en cuanto a la unión de factores. Además, permitieron establecer que la regulación transcripcional en cis se produce sólo en células hematopoyéticas debido a que sólo en ellas la cromatina tiene conformación abierta. De los sitios de unión conservados localizados, gracias a ensayos de luciferasa y silenciamiento del mRNA de RUNX1, se muestra que el sitio de unión de RUNX participa en la actividad amplificadora, aunque necesita la participación de otros factores que se unan al núcleo de CNS2. La línea CD69-BAC, que presenta una expresión alta de GFP y CD69 en linfocitos T, B y en células dendríticas mieloides pero baja en granulocitos, muestra alteraciones significativas en la distribución de los tipos celulares leucocitarios con esta elevada expresión. Así, el número de linfocitos T está aumentado en timo y disminuido en periferia, que también afecta a la población T reguladora, los linfocitos B están disminuidos en bazo pero no en ganglios linfáticos, y las células dendríticas están presentes en menor número en bazo y ganglios. Estos hallazgos concuerdan en gran medida con estudios previos en ratones transgénicos convencionales de CD69 y con los modelos S1P1 condicionales, reforzando aún más la cooperación CD69-S1P1 en la regulación de la distribución leucocitaria. En definitiva, los resultados encontrados en estos estudios sobre la regulación de la expresión de CD69 aportan nuevas evidencias sobre el papel de CD69 en la distribución de leucocitos, y como la región núcleo de CNS2 juega un papel muy importante en su regulación transcripcional, en parte gracias a la acción de los factores RUNX.