Aplicación galénica del modelo experimental reversible de síndrome de malabosorción oral generado por ebulina-f

Resumen

El proceso de obtención y caracterización de ebulina-f que se ha empleado en la realización de esta tesis ha sido previamente descrito por Citores y cols., 1998 y Jiménez y cols., 2013. El protocolo es muy largo y laborioso y cualquier error afecta notablemente al rendimiento. En la presente memoria, se ha tratado optimizar dicho proceso mediante el empleo de la liofilización, una operación básica farmacéutica. Sin embargo, la obtención de la ebulina-f purificada únicamente se ha logrado a partir de frutos verdes congelados sin liofilizar. En el caso de los frutos verdes liofilizados no se ha podido diferenciar los picos de las dos proteínas mayoritarias por falta de resolución cromatográfica. Por tanto, es necesario optimizar en estudios posteriores estos factores, para poder reproducir el protocolo en frutos liofilizados de mucha mayor estabilidad.La administración parenteral de dosis letales de ebulina-f provoca cambios histopatológicos en el estómago, los intestinos, los pulmones y el corazón. La mucosa del intestino delgado sin embargo, aparece considerablemente afectada; las vellosidades son más cortas y menos numerosas, edematosas y desestructuradas, mientras las criptas de Lieberkühn se encuentran llenas de restos de células muertas y con las paredes atróficas. Se observa un aumento muy llamativo del número de apoptosis en los enterocitos que componen el TAC, lo que conduce a una disminución de la tasa de rotación y consecuentemente, a la desaparición de muchas criptas y vellosidades. La lámina propia también se daña, perdiendo su asociación normal con el epitelio. El intestino grueso también se altera, pero en menor medida.El objetivo principal de este trabajo experimental y bibliográfico consiste en evaluar la capacidad de la ebulina-f, una RIP obtenida de frutos verdes de S. ebulus L., para generar un modelo de daño-regeneración intestinal de tipo enzimático similar al generado previamente con nigrina b, como consecuencia de la administración intraperitoneal de dosis subletales. Para ello se ha empleado vitamina C y glucosa como marcadores. Diversos estudios realizados en la presente memoria, han permitido establecer 2,2 mg/kg de peso corporal como la dosis intraperitoneal subletal de ebulina-f. Para determinar si la administración de dicha dosis, afecta a la permeabilidad vascular del epitelio intestinal, se administró azul de Evans VI en animales tratados previamente. Este estudio puso de manifiesto que la ebulina-f al igual que la nigrina-b, produce un aumento de permeabilidad vascular muy significativo a las 48 h de la administración IP de dosis subletales y que en el resto de tiempos evaluados, las diferencias no son significativas respecto al grupo control.La glucosa se absorbe a nivel del tracto gastrointestinal fundamentalmente mediante un mecanismo de transporte activo con cotransporte de sodio SGLT1-GLUT2 de manera análoga a la vitamina C. La administracio¿n de dosis IP subletales de ebulina-f produce un notable incremento en los niveles plasma¿ticos de vitamina C, que coincide temporalmente con el ambiente prooxidante generado en el lumen intestinal y con la regeneración de las criptas del intestino delgado. Las concentraciones de vitamina C tienden a recuperarse conforme se recupera el estado fisiológico del aparato digestivo. Por su parte, el descenso en las concentraciones plasmáticas de glucosa respecto al grupo control, sugieren sin embargo, que es probable que como consecuencia de la regeneración del tejido, disminuya la expresión de genes relacionados con la digestión y la absorción de nutrientes y que por tanto la funcionalidad completa del tejido necesite de más tiempo.