Nuevas formulaciones para la liberación de anfotericina b

Résumé

La anfotericina B, AmB, un antibiótico macrólico con una amplio espectro de acción, se utiliza desde hace más de 40 años para el tratamiento de infecciones micóticas sistémicas. Un inconveniente importante para el uso de esta molécula en clínica es, a parte de su baja solubilidad, su elevada nefrotoxicidad, así como el hecho de que se formule y comercialice solo para administración intravenosa. El desarrollo de nuevas formulaciones orales, intravenosas y, o tópicas de AmB con toxicidad reducida, permitirá no sólo el tratamiento de infecciones fúngicas sistémicas sino también el tratamiento de infecciones tópicas mixtas resistentes a tratamientos convencionales. El objetivo principal de la presente tesis es el desarrollo de nuevas formulaciones de AmB para el tratamiento de micosis sistémicas y tópicas. En esta tesis doctoral se desarrollaron dos tipos de formulaciones de AmB. La primera parte de la tesis se centró en el desarrollo de una nueva formulación tópica, una laca de uñas para el tratamiento de la onicomicosis resistente a tratamientos convencionales. La segunda parte de la tesis se realizó en colaboración con la Universidad Degli Studi di Padova y se centró en el desarrollo y la optimización de una formulación pegilada de AmB para el tratamiento de infecciones fúngicas sistémicas por vía oral e intravenosa. Con respecto a la formulación tópica de AmB, se prepararon diferentes formulaciones de lacas de uñas permeables e impermeables al agua. Se estudió el tiempo de secado, la viscosidad, el aspecto de la película, la extensibilidad, el brillo, la incorporación de AmB y el pH. De todas las formulaciones desarrolladas, tres de ellas fueron seleccionadas para su posterior caracterización y estudio in vitro, F11, F13 y F19. Los estudios de penetración in vitro en uñas de voluntarios sanos demostraron que la penetración obtenida con F19, fue mayor en comparación con F11, F13 y con el control. Los estudios de eficacia in vitro contra Candida albicans mostraron que la formulación más activa fue F19 con un 103 por ciento de eficacia. La laca de uñas de AmB fue activa contra las infecciones provocadas por dermatofitos y no dermatofitos localizadas en las estructuras queratinizadas. El tratamiento durante 30 días con F19, administrado en días alternos y una vez al día, eliminó las infecciones causadas por T. mentagrophytes, T rubrum, A. niger, F. oxysporum y F. solani. Respecto a la formulación pegilada de AmB, los estudios de solubilidad mostraron que el PEG5kDa colánico puede aumentar más de 105 veces la solubilidad de la anfotericina B. La alta afinidad de la AmB por el PEG5kDa colánico se observó mediante calorimetría isotérmica, ITC. El proceso de liofilización produjo un polvo esponjoso con bajo contenido en humedad y sin formación de torta que se mostró estable a lo largo del tiempo. Los estudios de CD mostraron que de formar similar a la Fungizona y a la Fungizona calentada, las micelas de AmB PEG5kDa colánico no indujeron alteraciones estructurales de la albúmina sérica humana, HSA. Los estudios de hemólisis confirmaron que las micelas de AmB PEG5kDa colánico eran menos hemolíticas que Fungizona. Los estudios biológicos in vitro demostraron que la AmB formulada con PEG5kDa colánico mantiene una alta actividad microbiana que está muy cerca de la AmB en solución. La administración oral de 5 mg por kg de AmB demostró que la nueva formulación desarrollada tenía la semivida más alta de todas las formulaciones ensayadas. Por último, la administración intravenosa de 1 mg por kg de AmB en AmBisome, Fungizone y AmB PEG5kDa colánico mostró que la nueva formulación desarrollada tenía una constante de eliminación aparente significativamente menor, P valor menor de 0,01, y consecuentemente una semivida más alta en comparación con las formulaciones comercializadas Ambisome and Fungizona