"Estudio proteómico de las vesículas extracelulares y del secretoma de ""Candida albicans"" y análisis funcional de proteínas de superficie celular"

Resumen

Candida albicans es un microorganismo patógeno oportunista muy importante en humanos, que puede causar diferentes tipos de infecciones como micosis superficiales o invasivas en pacientes inmunocomprometidos. Para causar daño en el hospedador, C. albicans cuenta con una serie de factores de virulencia. Entre ellos destaca la capacidad de cambiar su forma de crecimiento de levadura a hifa. La superficie celular es la estructura más externa de la célula y el punto de contacto entre el hongo y el hospedador. Con el fin de entender el papel de las proteínas en la superficie celular, se ha llevado a cabo un estudio fenotípico de 17 mutantes delecionados en los genes que codifican 17 proteínas identificadas en la superficie de C. albicans. Este estudio ha permitido describir la implicación de 4 nuevas proteínas descritas como posibles NADH ubiquinona oxidorreductasas o deshidrogenasas, Ali1, Mci4, Orf19.287 y Orf19.7590, en la transición dimórfica, la resistencia a condiciones de estrés y la interacción con las células del hospedador. Otras cuatro proteínas, Pst3, Tos1, Orf19.3060 y Orf19.5352, se han relacionado con la integridad de la pared celular y la interacción con macrófagos. El secretoma, o conjunto de proteínas secretadas por C. albicans, es también relevante en la interacción entre el patógeno y el hospedador. C. albicans secreta muchas proteínas relacionadas con la adquisición de nutrientes y el mantenimiento de la integridad de la pared celular que tienen un péptido señal en su secuencia responsable de dirigirlas a la ruta clásica de secreción. Sin embargo, parte de las proteínas identificadas en el medio extracelular de C. albicans no poseen dicho péptido señal y deben utilizar una ruta de secreción alternativa. En esta tesis se ha llevado a cabo el estudio proteómico del medio extracelular de C. albicans separando las vesículas extracelulares del resto de las proteínas secretadas, encontrando que la mayoría de las proteínas identificadas en el medio libre de vesículas tienen péptido señal y por tanto son secretadas por la ruta clásica de secreción, y las vesículas extracelulares transportan las proteínas citoplasmáticas y de membrana, algunas de ellas relacionadas con la reorganización de la pared celular. Por tanto, las vesículas extracelulares constituyen el mecanismo más importante utilizado por C. albicans para secretar proteínas que no presentan péptido señal. Por último, para conocer la función de la proteína Ecm33 en C. albicans, una proteína de pared celular con anclaje GPI, se ha realizado un análisis fenotípico del mutante carente de esta proteína, RML2U. Estudios previos identificaron Ecm33 en la pared celular, la membrana plasmática y en el medio extracelular y la relacionaron con la estructura de la pared y la virulencia. Los resultados de este trabajo indican que RML2U presenta defectos en su morfología y es sensible a altas temperaturas, al estrés osmótico y al estrés oxidativo. Además, el tamaño y el número de vesículas extracelulares son mayores que en la cepa silvestre, así como el número de proteínas que portan. También tiene alterada la ruta clásica de secreción, ya que secreta un número mayor de proteínas. Sin embargo, no es capaz de secretar la aspartil proteasa 2, proteína importante para la virulencia de C. albicans. La mayor sensibilidad de RML2U a rapamicina y su reducida longevidad en comparación con la cepa silvestre, relacionan la proteína Ecm33 con la ruta TOR. Además, se ha observado crecimiento en velo en RML2U, una película que se genera sobre el cultivo líquido, compuesta por células redondas de gran tamaño y que no se había descrito previamente en C. albicans. Por último, se ha llevado a cabo el análisis de la interacción de RML2U con macrófagos murinos, donde se ha observado que causa menor daño a los macrófagos que la cepa silvestre y presenta un patrón de muerte diferente.