Estrategias para la mejora del diagnóstico serológico de la besnoitiosis bovina

Resumen

La besnoitiosis bovina es una enfermedad re-emergente en Europa, producida por el protozoo apicomplejo Besnoitia besnoiti. En la actualidad el control de esta enfermedad se basa en la combinación de un diagnóstico preciso y la aplicación de medidas de manejo. A pesar de que se han desarrollado numerosas técnicas serológicas para detectar a los animales infectados, éstas no han sido validadas en estudios comparativos. Además, se ha puesto de manifiesto la necesidad de mejorar lasensibilidad de las técnicas para detectar a los animales infectados durante la fase aguda así como los crónicamente infectados que presentan bajos niveles de anticuerpos. Por otra parte, las pruebas diagnósticas también pueden dar lugar a un elevado número de resultados falsos-positivos que repercuten negativamente sobre el control de la enfermedad. Por ello, en la presente Tesis Doctoral se ofrecen soluciones para solventar las actuales limitaciones de las pruebas serológicas y, tras llevar a cabo diferentes abordajes, se ha desarrollado una nueva técnica más sensible y específica. En primer lugar, se han validado por primera vez las técnicas de diagnóstico serológico que se utilizan de forma rutinaria en Europa y se ha establecido un protocolo de diagnóstico común entre los países que emplean estas técnicas. En segundo lugar, se ha estudiado el origen de los resultados falsos-positivos, los cuales se ha observado que están asociados a la presencia y al nivel de anticuerpos específicos frente a otros protozoos relevantes en el ganado bovino Sarcocystis spp. y Neospora caninum En base a estos resultados, y con la finalidad de identificar nuevas dianas diagnósticas más específicas, se siguieron dos abordajes. En primer lugar, mediante herramientas proteómicas, se intentó identificar antígenos específicos del taquizoíto de B. besnoiti. Sin embargo, las proteínas identificadas están conservadas entre organismos eucariotas, lo que pone en evidencia la dificultad de identificar nuevas dianas. Por ello, a continuación, se obtuvieron ocho anticuerpos monoclonales dirigidos frente a taquizoítos de B. besnoiti, los cuales resultan de utilidad para estudios de la biología del parásito. Además, siete de ellos podrían ser útiles para el futuro desarrollo de un ELISA de competición, debido a su alta especificidad. En paralelo, se desarrolló una prueba ELISA basada en un nuevo extracto antigénico, que ha mostrado resultados muy prometedores de sensibilidad y especificidad, y que hace innecesaria la confirmación de los resultados mediante Western blot. Además, esta prueba también podría emplearse para el diagnóstico de la besnoitiosis en rumiantes silvestres. Por ello, y debido a la fácil producción de su extracto antigénico, resulta muy atractiva para su producción a gran escala y se ha protegido mediante una patente.