Identificación y caracterización de antígenos específicos del estadio de bradizoíto de "Neospora caninum"

Resumen

Neospora caninum es un parásito apicomplejo que ha sido identificado como una de las principales causas de aborto en ganado bovino y como responsable de enfermedad neuromuscular en diversas especies animales. Este protozoo está íntimamente relacionad o con Toxoplasma gondii, con el que comparte la característica de poseer un ciclo biológico con tres estadios infectantes (esporozoíto, taquizoíto y bradizoíto) así como la habilidad para persistir por tiempo indefinido dentro del hospedador, formando quistes tisulares que contienen bradizoítos en su interior y que se mantienen latentes hasta su reactivación. La necesidad de disponer de un método que permitiese la producción in vitro de bradizoítos de N. caninum para estudiar con mayor detalle l as características biológicas, genéticas e inmunogénicas de este estadio del parásito motivaron la primera parte de este trabajo (Capítulo II), en el que se comparó el efecto de diversos productos inductores de transformación taquizoíto-bradizoíto in vitro, utilizando el aislado Nc-Liverpool del parásito en un cultivo de células MARC-145. Para monitorizar la transformación taquizoíto-bradizoíto se utilizó la técnica de inmunofluorescencia doble con un anticuerpo monoclonal frente al antígeno de superficie específico de taquizoíto SAG1 (?SAG1) y un suero policlonal dirigido frente al antígeno intracitoplasmático específico de bradizoíto BAG1 (?BAG1). Se observó que el tratamiento diario con nitroprusiato sódico 70 ?M durante 7 días conseguía el mayor rendimiento con la mejor tasa de transformación (58.1%). Con este trabajo, se ha obtenido un método alternativo, simplificado y con mayores ventajas para la producción de bradizoítos de N. caninum, usando un sistema de cultivo fácil de prod ucir y mantener y con buenas perspectivas para la purificación de este estadio del parásito. Debido a que los taquizoítos y bradizoítos de N. caninum se distinguen, principalmente, por la expresión diferencial de antígenos específicos de estadio, y a l interés que estos antígenos pueden tener en la cronopatología de la neosporosis, consideramos necesario abordar la identificación y caracterización de genes específicos del estadio de bradizoíto, utilizando como herramienta el sistema de producción in vitro de bradizoítos de N. caninum desarrollado en el capítulo II. En un primer paso, se decidió identificar el ortólogo del gen SAG4 de T. gondii (TgSAG4) en N. caninum (Capítulo III). Para ello se diseñaron oligonucléotidos degenerados y se...