Determinación de los perfiles de expresión de marcadores de senescencia en lesiones orales potencialmente malignizables y en carcinomas orales de células escamosas

Abstract

Justificación y objetivos: Estudio transversal en 123 humanos en el que se compara la expresión de 19 proteínas relacionadas con las vías de senescencia, en cuatro grupos que representan las fases consecutivas de la carcinogénesis oral. Las proteínas analizadas son: actina, CDK4, CDK6, ciclina D1, DCR2, Dec1, E2F, hTERT, H-Ras, maspina, MDM2, p14, p15, p16, p21, p53, pRb, Rb, RAR-beta. Los grupos de estudio son: tejido oral sano (TOS), leucoplasia sin displasia (LOD negativa), leucoplasia con displasia (LOD positiva) y carcinoma oral de células escamosas (COCE). El objetivo principal es determinar si existen perfiles proteicos o proteínas relacionadas con las vías de senescencia inducida por oncogenes que puedan ser considerados marcadores de senescencia debido a una expresión diferencial en tejido oral sano, lesiones orales potencialmente malignizables y carcinomas orales de células escamosas. Esto no ha sido estudiado previamente analizando una representación tan amplia de proteínas de las vías senescentes ni en distintas fases de la carcinogénesis oral. La determinación de estos perfiles proteicos permitiría en el futuro seleccionar las proteínas diana para una terapia contra el cáncer oral basada en reactivar la senescencia, un mecanismo fisiológico contra el cáncer que consiste en el cese de la capacidad replicativa de las células. Material y métodos: Se incluyeron en el estudio 123 biopsias procedentes del Hospital Gregorio Marañón de Madrid y de la Facultad de Odontología de la Universidad Complutense de Madrid, con la autorización previa de comités éticos y pacientes. Las biopsias fueron fijadas en formaldehído e incluidas en parafina. Con ellas se confeccionaron dos tissue microarrays, con un total de 43 TOS, 28 LOD negativa, 23 LOD positiva y 29 COCE, al que se añadieron muestras de páncreas, amígdala, placenta, riñón y pulmón como controles. Estos TMA se cortaron con un grosor de 3 micras. Una sección fue teñida con hematoxilina y eosina y el resto mediante inmunohistoquímica para cada una de las proteínas. El análisis del grado de tinción de cada proteína la realizamos dos miembros del equipo cegados a los datos clínicos, mediante observación con microscopio óptico. Para determinar las diferencias de expresión de las proteínas entre los grupos, se utilizó la prueba Anova de un factor; y un test no paramétrico de comparaciones múltiples para determinar entre cuáles de ellos las diferencias eran estadísticamente significativas. Las correlaciones estadísticas entre la expresión de los distintos marcadores entre sí se analizaron mediante el coeficiente de correlación de Spearman. Y se empleó el análisis de clusters para determinar los perfiles de expresión de los marcadores proteicos en cada uno de los grupos. Resultados y conclusiones: El patrón de expresión más frecuente para las proteínas relacionadas con las vías de senescencia fue el patrón ¿en meseta¿; es decir, una expresión aumentada en las lesiones orales potencialmente malignizables y disminuida en los carcinomas. Este patrón se obtuvo para maspina, MDM2, p14, p15, p16, p21 y pRb. Sólo hubo diferencias estadísticamente significativas entre los grupos de tejido oral sano versus leucoplasia oral y de leucoplasia oral versus carcinoma oral de células escamosas para maspina, MDM2, p14 y p15. p16 no varió su expresión de manera estadísticamente significativa entre ninguna de las etapas de la carcinogénesis, ni siquiera en el grupo de los carcinomas. CDK4, DCR2, Dec1, H-Ras y RAR-beta no pudieron ser analizadas. En las lesiones potencialmente malignizables encontramos una correlación positiva fuerte de maspina con pRB, p21 y p15. En el análisis de clusters, maspina era la única proteína con una presencia aumentada en las lesiones potencialmente malignizables y considerablemente disminuida en los carcinomas. Es por tanto maspina la proteína que destaca como marcador de senescencia a nivel oral.