"Trichomonas vaginalis"corroboración experimental de modelos virtuales de cribado farmacológico y caracterización biomolecular de aislados

Resumen

La tricomonosis urogenital humana, causada por Trichomonas vaginalis, es una de las infecciones de transmisión sexual de mayor prevalencia con 276 millones de casos cada año. Esta enfermedad cursa con un rango amplio de manifestaciones clínicas, desde casos asintomáticos hasta cuadros invasivos más graves. Se ha relacionado la infección con el riesgo de adquisición del VIH y de lesiones neoplásicas de cérvix y próstata. El tratamiento de elección es el metronidazol, pero cada vez son más frecuentes los casos de resistencia y efectos secundarios al tratamiento. Por todo ello, la búsqueda de alternativas terapéuticas es una prioridad. El desarrollo computacional de modelos virtuales favorece el empleo de estas técnicas en las primeras etapas de investigación. Por otro lado, el parásito ha demostrado tener una variabilidad intraespecífica alta para sobrevivir en un medio sometido a fluctuaciones ecológicas y fisiológicas. El estudio del comportamiento genotípico y fenotípico podría permitir la caracterización de aislados del parásito. Los objetivos de este trabajo son el diseño y validación de un método de evaluación secuencial para la búsqueda de nuevos agentes tricomonicidas, y la caracterización biomolecular de aislados para determinar su posible clasificación. En el primer objetivo se ha desarrollado un procedimiento secuencial de cribado farmacológico que comprende tres etapas selectivas, el cribado in silico, in vitro e in vivo. El desarrollo del cribado in silico ha requerido la generación de una base de datos de 592 moléculas activas e inactivas frente a T. vaginalis. A continuación, mediante el uso de descriptores topológico se han diseñado 45 modelos virtuales empleando el software TOMOCOMDCARDD. Los modelos con mayor capacidad predictiva se seleccionaron y ensamblaron mediante el uso de sistemas multiclasificadores. La conclusión más destacada de este estudio es que el diseño de modelos virtuales QSAR ADL se sustenta en la diversidad estructural de la base de datos y, en el que el empleo de un sistema multiclasificador permite seleccionar los modelos que logren un efecto sinérgico en la predicción de actividad. Entre las aportaciones realizadas en el cribado in vitro, se ha optimizado un método espectrofluorimétrico empleando resazurina, el cual, ha mostrado una correlación excelente con el método microscópico. De los 169 compuestos ensayados, el VATR 145 con estructura 1 bencil 3,5 metilaminopentiloxi 5 nitroindazol destaca por su actividad in vitro y el compuesto VATR 137 con estructura 3 aminoindazólica mostró una actividad in vivo notable. Estos datos sugieren el empleo de los 1 bencil 5 nitroindazoles derivados con radicales 3 aminoalcoxilo como líderes para la síntesis de nuevos agentes tricomonicidas. Respecto al segundo objetivo, se han caracterizado diez aislados de T. vaginalis a través de siete características fenotípicas: sensibilidad a los 5 nitroimidazoles, citoadherencia y citotoxicidad, presencia de virus TVV, presencia de Mycoplasma hominis, patogenia en un modelo murino experimental y sensibilidad al complemento del suero humano. Las conclusiones más relevantes del trabajo señalan que la caracterización biológica de los aislados de T. vaginalis confirma su variabilidad intraespecífica y la heterogeneidad de las poblaciones. Los ensayos de sensibilidad al suero humano revelan la capacidad de T. vaginalis para incorporar la molécula CD59 o protectina del hospedador inhibiendo el complejo de ataque a la membrana del sistema del complemento activado. Asimismo, los estudios genotípicos empleando 3 marcadores microsatélites y la secuenciación de los SNPs de dos genes de copia única, GP63a y PMS1, permiten la agrupación intraespecífica en dos tipos. Finalmente, se confirma una correlación entre la presencia de retrovirus, la sensibilidad a 5 nitroimidazoles y la caracterización genómica mediante los loci anteriormente citados.