Origen y caracterización de los linfocitos TCR-αβ+CD4-CD8-doble negativos en relación a su posible naturaleza autorreactiva

Resumen

Las enfermedades autoinmunes como el lupus eritematoso sistémico o el síndrome linfoproliferativo autoinmune se caracterizan, tanto en humanos como en sus modelos murinos asociados, por una proporción anormalmente elevada de linfocitos T carentes de CD4 y CD8 (TCR-alfa/beta+CD4-CD8-; a partir de ahora referidos como ¿doble negativos¿, DN). Éstos presentan propiedades proinflamatorias pero se desconoce si desempeñan un papel importante en la etiología y patología de enfermedades autoinmunes. Varias evidencias sugieren que estos linfocitos representan células T autorreactivas en dichas enfermedades y que podrían derivar de células T CD8+ previamente activadas. En base a ello, este trabajo pretende investigar el carácter autorreactivo de los linfocitos T DN (ontogenia, identificación de subpoblaciones celulares y sus propiedades pro- o anti-inflamatorias).En ratones que expresan TCR transgénicos restringidos por moléculas MHC de clase I (OT-I y HY), se estudió la respuesta de las células T que poseen estos TCR al encontrar el antígeno específico (respectivamente la ovoalbúmina, OVA, y Smcy). Cuando los linfocitos T con TCR transgénico se desarrollaban en ratones que expresaban el antígeno específico como autoantígeno, se observó un incremento considerable en la frecuencia de células T DN. La transferencia de linfocitos T CD8+ OT-I o HY a ratones que expresaban el autoantígeno, produjo que las células T CD8+ se activasen, proliferasen y perdiesen la expresión de CD8 convirtiéndose en linfocitos DN. Este proceso no ocurrió cuando su antígeno era presentado como exógeno asociado a Listeria monocytogenes. Los linfocitos T DN derivados de células T CD8+ autorreactivas (srDNT) fueron incapaces de proliferar bajo estimulación por TCR, expresaban niveles elevados de HELIOS y PD-1, presentaban la capacidad potencial de producir significantes cantidades de IL-17 e IFN-gamma y no mostraron características de células T reguladoras. Además, la conversión a srDNT solamente ocurría en aquellos tejidos donde se expresa activamente el autoantígeno. De forma interesante, observamos que la población equivalente de células TCR-alfa/beta+ DN en ratones C57BL/6 adultos, sanos y sin ninguna manipulación, podían separarse en PD-1- y PD-1+. La población PD-1+ no se componía de células NKT ni MAIT y expresaba mayores niveles de HELIOS que la contraparte PD-1-. Estas DN PD-1+ expresaban niveles incrementados de IL-2Rß, LFA-1, y CD43, y carecían de la expresión de IL-2R¿, IL-7R¿ y Ly-6C, fenotipo que sugería la activación previa de la célula T mediante el reconocimiento del antígeno específico y exposición crónica al mismo a través del TCR, y compartido con las srDNT. Estos linfocitos T DN presentaban producción potencial de citoquinas proinflamatorias y de transcritos codificantes para moléculas relacionadas con Th17; en concreto, las células T DN PD-1+ tenían alta expresión de ROR-gamma/t. Estas células PD-1+ dependían de moléculas de MHC de clase I para su desarrollo, pero eran independientes de la presencia microbiota, y su proporción se incrementaba en modelos murinos de autoinmunidad. Por último, se demostró la naturaleza autorreactiva de los linfocitos T PD-1+ mediante el análisis ex vivo de la expresión de GFP en células T de ratones Nur77-GFP, una cepa donde la expresión de GFP es proporcional a la intensidad con la que el TCR reaccione contra un antígeno: niveles elevados de GFP denotan encuentro con antígeno específico.En resumen, en el presente trabajo se proporcionan evidencias fuertes que señalan la naturaleza autorreactiva de los linfocitos T DN PD-1+, que derivan de células T CD8+ activadas; su capacidad de producción de IL-17, y que son activadas mediante MHC de clase I presentando antígenos endógenos, independientemente de la presencia de microbiota intestinal.