Señalización intracelular y perfil epigenético de linfocitos B en la inmunodeficiencia común variable

Resumen

La Inmunodeficiencia Común Variable (IDCV) es la inmunodeficiencia primaria sintomática más frecuente que cursa con hipogammaglobulinemia y un cierto grado de alteración del compartimento B. Como hipótesis de este trabajo se planteó si la alteración en la diferenciación, supervivencia y activación del linfocito B en la IDCV podría deberse a defectos en vías de señalización que conllevan a la activación de NFkB y a mecanismos epigenéticos de control de la transcripción génica. La maduración del linfocito B requiere de la integración de señales de supervivencia y activación, que dan lugar a la activación de factores de transcripción clave como NFkB. Esta señalización acaba induciendo la expresión de miembros antiapoptóticos de la familia de Bcl-2. El análisis de la proteína Bcl-2 pone de manifiesto la reducción de esta proteína en los estadios de linfocitos B de memoria, de forma más acusada en los linfocitos B Sm (con cambio de isotipo) en los pacientes con IDCV. Para tratar de determinar si la señalización de la vía de NFkB está alterada en las células B de los pacientes IDCV, estudiamos la inducción de dos de las dianas de NFkB. Los pacientes con IDCV muestran una reducción en los niveles de ARNm de Bcl-2 y Bcl-xl tras activación. Quedando de manifiesto el defecto en la señalización de NFkB, que impide el aumento de expresión de dos de sus dianas antiapoptóticas. La activación del BCR también conlleva a la activación de PI3K que es fundamental para la proliferación y supervivencia de las células B. Tanto Akt como S6 son dos de los intermediarios de la compleja cascada de señalización del linfocito B, cuya activación está mediada por fosforilación. Se observan defectos en la fosforilación de Akt tras activación del BCR, en diferentes subpoblaciones de linfocitos B de los pacientes con IDCV, así como reducción generalizada de la fosforilación S6 en las células B de los pacientes a tiempos más largos de activación. Los mecanismos epigenéticos como la metilación del ADN y los microARNs se definen como los cambios heredables que afectan a la función de los genes sin que haya un cambio en la secuencia del ADN. Como análisis exploratorio del estudio de microARNs, se realizó un microarray. Por Q-PCR se validaron los microARNs que mostraban una mayor expresión diferencial entre pacientes con IDCV y controles. Este es el primer estudio de microARNs, que tengamos constancia hasta el momento, de desregulación en la expresión de microARNs en la patogenia de la IDCV. Así mismo en este trabajo hemos querido profundizar en hallazgos previos de alteraciones en la demetilación de CpGs en la transición desde células Naive a células Sm. Partiendo de un abordaje experimental complementario se constatan niveles de metilación más altos en los linfocitos Sm en algunas de las CpG estudiadas en genes clave de la biología del linfocito B. La hipermetilación de las células de memoria de estos genes es más acusada en pacientes con reducción de subpoblaciones de memoria. Las alteraciones en la inducción de proteínas antiapoptóticas mediada por NFkB, así como los defectos en la vía de señalización mediada por fosforilación tras activación del BCR, sugieren defectos en la señalización intracelular del linfocito B en la IDCV. El enfoque epigenético de la enfermedad pone de manifiesto la implicación de nuevos factores de control transcripcional que podrían estar estar contribuyendo como factores patogénicos en la desregulación del linfocito B en la IDCV.