Actividad de plazomicina frente a aislados clínicos de Eschericia Coli resistentes a Cefalosporinas de tercera generación.caracterización de sus mecanismos de resistencia

Resumo

Escherichia coli es el principal agente uropatógeno, siendo responsable de la mayoría de las infecciones del tracto urinario (ITU) que afectan al ser humano. La resistencia a cefalosporinas de tercera generación, mediada por las cepas productoras de ß-lactamasas de espectro extendido (BLEEs) y de ß-lactamasas AmpC, es un problema creciente en todo el mundo, que frecuentemente se asocia con la resistencia a otras familias de antimicrobianos. La presencia de aislados E. coli productores de estas enzimas limita las opciones de tratamiento, indicando la necesidad de nuevas opciones terapéuticas. El objetivo general de esta tesis fue caracterizar los mecanismos de resistencia tanto a ß-lactámicos como a los aminoglucósidos mas utilizados en la clínica en 347 aislados de E. coli resistentes a cefalosporinas de tercera generación, procedentes de infecciones urinarias diagnosticadas durante el año 2013 en el Hospital Clínico San Carlos de Madrid y evaluar la actividad in vitro de un nuevo aminoglucósido, plazomicina, en desarrollo clínico para ITUs complicadas, frente a esos aislados. Además estudiamos la actividad de dos antibióticos clásicos para el tratamiento de las ITUs no complicadas: fosfomicina y nitrofurantoína. En el presente estudio se determinaron las CMIs a distintos ß-lactámicos, aminoglucósidos, así como a fosfomicina y nitrofurantoína mediante el método de dilución en agar. Se diferenciaron fenotípicamente las cepas productoras de BLEE de las de AmpC. Se realizó la detección genotípica por PCR de los principales tipos de BLEE y AmpC plasmídica (p-AmpC). Además, en los aislados que presentaron resistencia a alguno de los aminoglucósidos ensayados, se realizó la caracterización molecular de los genes que codifican las enzimas modificantes de aminoglucósidos (EMAs) más comunes en E. coli: aac(3)-IIa, aac(6¿)-Ib, ant(2¿¿)-Ia y aph(3¿)-Ia. Se confirmó la producción de BLEE en 303 (87,3%) de los aislados frente a 44 que resultaron tener fenotipo AmpC (12,7%). El principal tipo de BLEE fue CTX-M (229 aislados), siendo el 50,2% productores de CTX-M-15. Entre los aislados AmpC, el 70,5% resultaron productores de p-AmpC del tipo CMY. De las 347 cepas, 144 fueron resistentes al menos a uno de los aminoglucósidos incluidos en nuestro estudio. Las tasas de resistencia a tobramicina, gentamicina y amikacina fueron 39,2%, 27,9% y 1,5%, respectivamente. Se observó una notable diversidad de EMAs, con 12 patrones diferentes. El gen de EMA más común fue aac(6¿)-Ib. Todas las cepas con aac(6¿)-Ib fueron resistentes a tobramicina y el 29% presentaron valores de CMIs > 8 mg/L de amikacina. A su vez, todas las cepas que presentaron el gen aac(3)-IIa fueron resistentes a gentamicina. El gen aac(6¿)-Ib se asoció con la presencia de CTX-M-15 [64/73; 87,7% (P < 0,01)] mientras que el 60% (18/30) de las cepas productoras de CTX-M-grupo 9 portaban el gen aac(3)-IIa (P < 0,01), y el gen ant(2¿¿)-Ia se asoció con la presencia de p-AmpC [3/6; 50% (P = 0,03)]. Plazomicina fue muy activa frente a los aislados urinarios de E. coli productores de BLEE y/o AmpC incluidos en nuestro estudio, con unas CMIs que oscilaron entre 0,25 y 4 mg/L y que fueron independientes del tipo de EMA presente. Plazomicina representa una buena alternativa para el tratamiento de estas cepas multirresistentes. Fosfomicina y nitrofurantoína conservan buena actividad para el tratamiento de las cistitis no complicadas, pero se necesita un seguimiento de su resistencia.