Células natural Killer como estrategia terapéutica frente a mieloma múltiple

Resumen

El mieloma múltiple (MM) se caracteriza por un exceso de células plasmáticas en médula ósea que sintetizan elevadas cantidades de proteína monoclonal. Los nuevos fármacos han mejorado considerablemente el pronóstico de la enfermedad, pero ésta sigue siendo incurable. Los pacientes con MM presentan una desregulación del sistema inmune y la terapia celular podría ejercer una acción citotóxica directa y a su vez estimular otras células para producir una respuesta inmunológica mayor. Las células natural killer (NK) son candidatas idóneas ya que pueden desencadenar una respuesta citotóxica al primer contacto con el antígeno tumoral. Este trabajo explora la posibilidad de activar y expandir ex vivo células NK autólogas de pacientes con MM para evaluar su capacidad citotóxica in vitro, así como su seguridad y eficacia in vivo en el contexto de un ensayo clínico. Se observó que las células NK de pacientes con MM no eran capaces de destruir las células de MM y, concretamente, las células clonogénicas de MM, con la misma eficacia que las células NK de donantes. Se expandió las células NK de pacientes mediante cocultivo con la línea K562mb1541BBL. Tras 21 días, se obtuvo un número de células NK activadas y expandidas (NKAEs) 16 veces superior al inicial. Se observó además que estas NKAE poseían una potente actividad citotóxica in vitro, incluso frente a la célula tumoral clonogénica, superior a la de células NK procedentes tanto de pacientes como de donantes. Las NKAE presentaban un fenotipo altamente citotóxico con sobreexpresión de los receptores NKG2D y NKp30 y, además, estos receptores se encontraban implicados en la citotoxicidad de las NKAE. Se detectó la side population en muestras de MM tanto en líneas celulares de MM como en células de MM primarias. Sólo la reserpina fue capaz de inhibir la capacidad de las células de la side population de MM para expulsar fármacos. El análisis por RNAseq mostró que la side population de MM sobreexpresaba genes implicados en el metabolismo de células madre. Además, el inmunofenotipo de ligandos para receptores de células NK reveló que éstos muestran el mismo nivel de expresión en células side population que en el resto de células tumorales, siendo susceptibles a la citotoxicidad de las células NKAE. Se observó que las células NKAE eran capaces de destruir las células de la side population in vivo del mismo modo que el resto de células de MM. Sin destruir la célula madre hematopoyética sana CD34+. Se realizó un ensayo clínico fase I para evaluar la seguridad de infusiones repetidas de células NKAE en pacientes con MM refractario (NCT02481934). Se produjo células NKAE a escala clínica y se incluyeron 5 pacientes. Se obtuvo un número de células NKAE 45 veces superior al incial sin contaminación de linfocitos T. Las células NKAE no presentaban potencial oncogénico y no produjo toxicidad en los pacientes más que una moderada neutropenia relacionada con el tratamiento antineoplásico. Los 5 pacientes mostraron estabilización de la enfermedad o respuesta parcial. Las células NKAE infundidas fueron detectadas en sangre periférica tras infusión ya que se apreció el inmunofenotipo altamente citotóxico, un aumento del porcentaje relativo de células NK tanto y un aumento de IFN¿ en suero. No se detectaron mecanismos compensatorios que produjesen una regulación negativa de las células NKAE infundidas. Por lo tanto, las células NKAE procedentes de los propios pacientes con MM poseen una elevada capacidad citotóxica frente a MM inclusive frente a células con características propias de células madre, como la célula tumoral clonogénica o la célula tumoral resistente a tratamiento farmacológico. Asimismo, es factible realizar múltiples infusiones consecutivas de células NKAE sin toxicidad asociada. Finalmente, esta terapia ha resultado ser eficaz en pacientes con MM refractario, por lo que estos hallazgos sientan las bases para el desarrollo de esta terapia celular autóloga con células NKAE en MM refractario.