Estudio de la respuesta de linfocitos T condicionados por células epiteliales de la mucosa oral

Resumen

A nivel de la mucosa oral se articulan importantes mecanismos de defensa frente a microorganismos patógenos y de tolerancia frente a comensales y antígenos alimentarios. Para ello, la mucosa oral concentra gran cantidad y diversidad de células del sistema inmunitario y es empleada como vía de inmunización. Las células dendríticas (DC) juegan un papel clave en el control de la inmunidad de las mucosas. Capturan y presentan antígenos a los linfocitos T CD4 habilitando sus propiedades efectoras y condicionando su diferenciación en diferentes fenotipos (Th1, Th2, Treg, etc) que determinan y controlan el tipo de respuesta inmunitaria que se produce. Sin embargo, son las células epiteliales las que primero y más estrechamente interaccionan con los microorganismos y antígenos extracelulares y las que a través de factores solubles parecen educar a las DCs condicionando el desarrollo de la respuesta inmunitaria. En esta tesis hemos estudiamos el papel condicionante de las células epiteliales de la mucosa oral en la respuesta inmunitaria. En concreto, estudiamos la respuesta de estas células frente a Bactek® (vacuna sublingual bacteriana) y analizamos esta respuesta relacionándola con la modulación que ejercen sobre DCs y el efecto de éstas en la diferenciación de LT CD4 naïve. Además, hemos estudiamos el efecto directo que las células epiteliales orales ejercen sobre linfocitos T CD4, controlando su función en ausencia de DCs. Para llevar a cabo estos estudios se utilizaron las líneas epiteliales de la mucosa oral H413 y TR146 y células epiteliales primarias extraídas de la mucosa oral de voluntarios sanos. Como agente estimulante utilizamos Bactek® vacuna compuesta por bacterias inactivadas que conservan su integridad estructural, prescrita para evitar infecciones en las vías aéreas. Nuestro resultados mostraron que las células epiteliales de la mucosa oral respondieron a Bactek® sobre-expresando MHC-I, MHC-II, y las líneas epiteliales incrementaron la expresión de IL6 e IL8. Además, cuando las DCs se cultivaron con células epiteliales maduraron parcialmente impidiendo generar una respuesta activa al ser tratadas con la vacuna bacteriana, inhibiéndose la secreción de IL12 y aumentando la secreción de IL10. En estas condiciones, la diferenciación de linfocitos T CD4 naïve estaba alterada, generandose linfocitos T CD4 no productores de IFN¿ y un incremento de linfocitos regualdores T CD4 CD25+FoxP3+. Por tanto, la presencia de las células epiteliales produce una disminución de la respuesta inmune efectora, promoviendo un fenotipo regulador y promoviendo una respuesta de tolerancia. Nuestros estudios revelaron que las células epiteliales tienen un efecto directo sobre el condicionamiento de los linfocitos T CD4. El contacto directo de célula epitelial con linfocitos T generó una pérdida de la activación de estos, acompañado del bloqueo de la liberación de IFN¿ y TNF¿ junto con el incremento de TGF¿. Sin embargo este aumento en TGF¿ no fue el mecanismo inductor de la disminución de estas citoquinas, ya que su bloqueo con un anti-TGF¿ no revirtió la producción de las mismas. Los linfocitos T CD4 fueron incapaces de proliferar en contacto directo con células epiteliales pero tampoco entraron en apoptosis, observando incluso una disminución de PD-1. Los linfocitos T CD4 condicionados por células epiteliales quedaron en un estado de semi-anergia, no produciendo niveles normales de IFN¿¿cuando fueron re-estimulados con anti-CD3 y anti-CD28. Además, los linfocitos T CD4 activados con anti-CD3 y anti-CD28 condicionaron la respuesta de las células epiteliales, incrementando su expresión de MHC-I, MHC-II. En resumen, la célula epitelial de la mucosa oral condiciona la respuesta de linfocitos T, por un lado modulando la actividad de la célula dendrítica presentadora de antígeno induciendo un fenotipo semimaduro y por otro, inhibiendo de forma directa el estado de activación del linfocito T determinando su respuesta.