Inducción de cambios metabólicos e inflamatorios en aorta sana a partir de medios condicionados de pacientes con aneurisma de aorta abdominal

Résumé

El conocimiento sobre la fisiopatología de los aneurismas de aorta abdominal (AAA) ha crecido en las últimas décadas. Existe una destrucción de la matriz extracelular, apoptosis de células musculares lisas y aumento de estrés oxidativo lisas, en el contexto de un proceso inflamatorio crónico en el que participan linfocitos T y B, macrófagos y plaquetas. También se ha observado un predominio del metabolismo anaerobio en el tejido aórtico aneurismático. Sin embargo, todavía se desconoce la causa que inicia dichos procesos.Los medios condicionados (MC) permiten exponer tejidos a sustancias desconocidas que pueden tener un efecto biológico. Es una herramienta útil para identificar los grupos celulares responsables de un proceso fisiopatológico que no es bien conocido.La hipótesis planteada es que cultivos con medios condicionados por plaquetas (MC-P), células mononucleares (MC-M) y tejido aneurismático (MC-AAA) de pacientes con AAA podrían inducir los cambios iniciales en la fisiopatología de los AAA sobre aorta sana, aportando información acerca de cuál de estos tejidos o grupos celulares es el responsable del inicio de la fisiopatología de los AAA.Los objetivos del estudio son analizar el efecto de los MC sobre el tejido aórtico sano, en cuanto a marcadores inflamatorios, producción de metaloproteinasas, estado de estrés oxidativo y metabolismo.Se tomaron muestras AAA durante la cirugía de reparación de éstos, y sangre periférica de los pacientes intervenidos obteniendo plaquetas y células mononucleares. Con dichas muestras se generaron tres MC: MC-AAA, MC-P y MC-M. Asimismo se obtuvo tejido aórtico sano de pacientes donantes en parada cardiorrespiratoria, que se cultivó durante 48 horas en cada uno de los MC, además de en un medio control. Posteriormente se cuantificaron distintas moléculas y actividades enzimáticas en el tejido aórtico: IL-1b, IL-6 y CD40L mediante ELISA; gp91phox, MMP-9 y malato deshidrogenasa (MDH) mediante western blot; actividad de lactato deshidrogenasa (LDH), actividad de MMP-9 y contenido de piruvato y lactato mediante kits comerciales. Se compararon los resultados obtenidos en cada MC, con los obtenidos en el medio control.Se obtuvieron muestras de 6 pacientes con AAA para creación de MC y de 6 aortas sanas para su cultivo en los mismos. La expresión de IL-1b e IL-6 se vio incrementada por el MC-AAA y por el MC-M. El MC-P aumentó la expresión de IL-1b y de CD40L, esta última, no fue incrementada por los otros dos MC. Se observó una tendencia a una mayor expresión de gp91phox en los 3 MC. La actividad de MMP-9 fue superior en los tejidos expuestos al MC-M, sin diferencias entre los otros dos MC y el control. Sin embargo, la expresión de la misma fue inferior en los tres MC respecto al grupo control.La actividad de LDH se vio reducida en los MC. Sin embargo, se observó una menor expresión de MDH en los tres MC, que en el caso del MC-AAA se asoció además a un mayor contenido de lactato. No se observaron diferencias en el contenido de piruvato entre los MC y el grupo control.Los resultados obtenidos muestran una inducción de cambios inflamatorios característicos de los AAA por los 3 MC, aunque en el caso del MC-P la inflamación es selectiva para marcadores de inflamación crónica. Asimismo, se ha observado inducción de otros procesos relacionados con la fisiopatología de los AAA como es el incremento del estrés oxidativo y modificaciones en la expresión de la MMP-9 y su actividad, que podrían reflejar cambios iniciales en dichos procesos fisiopatológicos. El MC-AAA ha inducido además un incremento del metabolismo anaerobio. Este cambio no es atribuible a condiciones de hipoxia que pueden existir in vivo, dado que en nuestro experimento no se daba dicha condición. En global, el MC-AAA ha sido el que más específicamente ha reproducido los cambios observados en los AAA, lo que sugiere que el estímulo original que provoca los cambios fisiopatológicos característicos de los AAA se encuentra en la propia aorta.