Estudio del papel de la molécula CD69 en la regulación de la inflamación y angiogénesis mediante estrategias bioanalíticas

Resumen

El antígeno CD69 es una proteína transmembrana expresada en leucocitos tras su activación y que persiste en infiltrados leucocitarios de tejidos inflamados en enfermedades crónicas y autoinmunes. Los ratones deficientes en CD69 muestran una respuesta inflamatoria exacerbada en modelos animales de estas enfermedades, lo que confiere a CD69 un papel como regulador de la respuesta inmune. Hemos analizado el papel inmunomodulador de CD69, en el modelo de diálisis peritoneal, demostrando que CD69 tiene un papel regulador en enfermedades que cursan con procesos fibroproliferativos, como la fibrosis peritoneal, inducida por exposición al líquido de díalisis. Los animales deficientes en CD69, manifiestan de manera exacerbada la respuesta Th17 y el proceso fibrótico generado después de la inflamación. Dado que la respuesta inflamatoria Th17, se modula mediante las células T reguladoras (Treg), el equilibrio entre ambas células es crucial para la regulación de la respuesta inmune, en éste trabajo ahondamos en los mecanismos moleculares que permiten a CD69 regular la función y diferenciación de las células Treg. La implicación del microRNA 155 (miR155) y su promotor BIC en el desarrollo de las células T reguladoras del timo (tTreg) está muy estudiada. Sin embargo, la vía de activación del miR155 que conduce a la diferenciación de las células tTreg no se conoce. En este trabajo mostramos que la regulación de la expresión de CD69, es crítica para la diferenciación de células tTreg y la homeostasis de las células T reguladoras periféricas (pTreg). La ausencia de CD69 inhibe la activación de la ruta de Stat5 conduciendo a una menor transcripción de BIC y miR155 y a un incremento de la expresión de la diana de miR155, SOCS1, inhibiendo de este modo la diferenciación de tTregs. Por consiguiente, los ratones deficientes en miR155 tienen un desarrollo alterado de las células Treg CD69 positivas y la sobreexpresión de miR155 induce al receptor CD69, lo que sugiere que ambas moléculas se activan concomitantemente en un bucle de retroalimentación positivo. Nuestros datos demuestran que el receptor CD69 actúa como una molécula clave y no redundante en el proceso de diferenciación de células tTreg, contribuyendo a preservar los mecanismos de homeostasis inmune. Las enfermedades cardiovasculares causadas por isquemia tienen un componente inflamatorio. Hay estudios que relacionan a los linfocitos Th17 y Treg como moduladores antagónicos de los procesos de vascularización postisquemia. En este trabajo demostramos la implicación de CD69 en procesos de angiogénesis, desde dos puntos de vista; el papel de CD69 como mediador inmune a través de la regulación del balance Th17 y Treg y su papel como regulador de distintos procesos angiogénicos en las células endoteliales. Además del papel de CD69 en la regulación de balance Th17 y Treg, las células Th17 secretan el microRNA 721, que interviene en el proceso de angiogénesis modulando la expresión de su diana Meox2, regulador negativo de la angiogénesis. La diferencial expresión de la proteína Meox2 en el endotelio de animales WT o deficientes en CD69, nos lleva a plantearnos usar la técnica de SILAC, para conocer los pooles de proteínas diferencialmente expresados en el endotelio de los animales WT y deficientes en CD69. El análisis bioanalítico por SILAC de las células endoteliales reveló numerosos procesos y proteínas regulados por CD69, este estudio abre nuevas vías de investigación que postulan a CD69 como modulador de distintos procesos en enfermedades cardiovasculares. En resumen, en esta tesis se ha estudiado el papel de CD69 en procesos fibroproliferativos, de tolerancia inmunológica, de diferenciación de las células Treg y de revascularización postisquemia. Todos estos procesos regulados por CD69, tienen enorme importancia en numerosas patologías inmunes y cardiovasculares.