Identificación de proteínas coiled-coil específicas de plantas en el núcleoesqueleto de Allium cepa l. Var. Francesa

Resumen

RESUMEN Las proteínas de tipo coiled coil son los componentes mayoritarios del núcleoesqueleto (NSK) de metazoos cuya principal familia son las laminas. Las plantas carecen de ortólogos de los genes que codifican para estas proteínas aunque tienen pr oteínas que son reconocidas por anticuerpos contra ellas, demostrando la conservación de epítopos. Esto nos llevó a formular la hipótesis de que las plantas podrían tener proteínas estructurales del NSK específicas con dominios conservados con las pr oteínas animales pero con similitud de secuencia muy baja, que constituirían homólogos funcionales de las mismas. El objetivo de esta Tesis Doctoral era investigar las proteínas estructurales de tipo coiled coil en el NSK de células meristemáticas de la planta monocotiledónea Allium cepa, un sistema en el que se conocen abundantes datos sobre su NSK. Se han analizado dos tipos de proteínas con estructura coiled-coil: espectrinas y filamentos intermedios nucleares (NIFs). Las plantas carecen de o rtólogos claros de las proteínas de la superfamilia de espectrina pero tienen secuencias que podrían ser homólogos funcionales, así como proteínas que son reconocidas por los anticuerpos antiespectrinas. En este trabajo hemos utilizado anticuerpos co ntra las cadenas alfa y beta de espectrina eritrocítica de pollo y alfa-espectrina no eritrocítica de mamíferos que han demostrado la presencia de proteínas inmunológicamente relacionadas con ellas en el núcleo de Allium cepa y han permitido su carac terización. El análisis inmunoquímico ha revelado dos bandas con movilidad electroforética semejante a las espectrinas alfa y beta (240 y 220 kDa), aunque la más abundante es una banda de 60 kDa con varias formas isoeléctricas con valores entre 5,1 y 5,7 de pI, así como bandas intermedias que corresponden probablemente a productos de degradación proteolítica. Los resultados de inmunofluorescencia e inmunomarcado con oro para ME demostraron una distribución de las proteínas en diferentes dominios nucleares: envoltura nuclear, retículo intercromatínico y pericromatínico, nucléolo y focos nucleares, sugiriendo su implicación en diversas funciones nucleares. La extracción secuencial de los núcleos ha demostrado que estas proteínas son component es estructurales del NSK subyacente. Mediante inmunoprecipitación hemos revelado la asociación de las proteínas semejantes a espectrina nucleares con actina, demostrando que son proteínas de unión a actina (ABPs) nucleares estructurales en este siste