Papel de la fosfatasa de regeneración hepática 1 (PRL-1) durante el ensamblaje de la sinapsis inmunológica y la activación de los linfocitos T

Resumen

Los linfocitos CD4 naíf se activan en el ganglio linfático y se diferencian a distintos subtipos de células efectoras Th (Th1, Th2, Th17 y Treg), que actuarán en la periferia para combatir distintos tipos de patógenos. La activación de la célula T, tanto en el ganglio como en la periferia, tiene lugar en el contexto de la sinapsis inmunológica (IS), un contacto dinámico y especializado entre una célula presentadora de antígeno (APC) y un linfocito. Durante el ensamblaje y maduración de la IS, la estimulación del receptor de la célula T (TCR) y la señalización a través de moléculas de adhesión y de coestimulación desencadenan redes de señalización que conducen a la activación del linfocito T y su función efectora. Además, la dinámica de actina juega un papel fundamental tanto en el establecimiento de la IS como en la progresión de la señalización necesaria para alcanzar la completa activación del linfocito T. Las redes de señalización inducidas durante la estimulación y diferenciación de la célula T están controladas por fosfo/defosforilación tanto de proteínas como de fosfoinosítidos. Miembros de la familia de las proteínas fosfatasas de tyrosina (PTPs) defosforilan estos sustratos. Más de la mitad de las PTPs pueden defosforilar residuos de serina y treonina, y pueden definirse como PTPs no clásicas (NC). Aunque los linfocitos T CD4 expresan un gran número de PTPs NC, el papel de muchas de ellas durante activación y diferenciación de estas células es desconocido. Por tanto, los objetivos de esta tesis fueron (i) estudiar cambios en el perfil de expresión de PTPs NC durante la polarización y reestimulación Th1 y (ii) estudiar el reclutamiento a la IS y el papel regulador en el ensamblaje de la IS y en la señalización por el TCR de la PTP NC PRL-1. El estudio del perfil de expresión de PTPs durante la polarización y reestimulación Th1 reveló cambios en los niveles de expresión de varias PTPs, lo que sugiere que las células naíf y las células efectoras requieren distintos niveles de estas enzimas. Además, la expresión de diversas PTPs NC se reguló durante la estimulación Th1, lo que sugiere que algunas de estas enzimas podrían ser nuevos reguladores de las respuestas T. Uno de los grupos de PTPs reguladas durante la reestimulación Th1 fue el de las fosfatasas de regeneración hepática (PRLs). El aumento de expresión de PRL-1 durante la estimulación T y su papel como regulador del citoesqueleto de actina descrito en la literatura nos condujo a estudiar su reclutamiento a la IS. PRL-1 se reclutaba inicialmente a las membranas que escanean la APC, y posteriormente se polarizaba a la IS junto con el compartimento endosomal. Además, PRL-1 colocalizaba con LFA-I y CD3 en la sinapsis madura. Experimentos de microscopía de reflexion interna total confirmaron copresencia de PRL-1 y CD3¿ en la IS y durante el contacto inicial con superficies activadoras. En conjunto, estos datos sugieren que PRL-1 participa en la dinámica y señalización del TCR en la IS. El reclutamiento inicial de PRL-1 a las membranas que escanean la APC nos llevó a estudiar el papel de esta proteína en la dinámica de actina durante el ensamblaje de la IS. La sobreexpresión de PRL-1 provocó un defecto en el aclaramiento de actina y en la extensión de la célula T sobre superficies activadoras, mientras que la inhibición de la actividad catalítica provocó una disminución en la polimerización de actina en la IS. Estos efectos sobre el citoesqueleto de actina podrían deberse a la regulación de las Rho GTPasas Rac1, Cdc42 y RhoA por PRL-1. Por último, la sobreexpresión de PRL-1 condujo a mayores niveles de inducción de CD69, de secreción de IL-2 y de activación de fosfolipasa C ¿ 1 (PLC¿1), mientras que la inhibición de la actividad catalítica de PRL-1 tuvo el efecto opuesto. En conjunto, estos datos sugieren que PRL-1 regula la dinámica de actina durante el ensamblaje de la IS y es un regulador positivo de la activación de la célula T.