Efecto de las plaquetas en la expresión proteica de segmentos de aorta sana y preinflamadaun abordaje proteómico

Resumen

Actualmente poseemos un amplio conocimiento de los efectos que ejerce la pared vascular sobre las plaquetas, pero son muy escasos y limitados los estudios que examinan el efecto contrario, el de las plaquetas sobre la expresión proteica de la pared vascular. Las plaquetas son fuente de numerosos mediadores, incluyendo factores de crecimiento y otras sustancias que pueden influir en la expresión de proteínas de la pared vascular. En este sentido, estudios in vitro han sugerido que las plaquetas pueden modular la expresión de proteínas asociadas al proceso inflamatorio. El en presente estudio se analizó si las plaquetas pueden modificar la expresión proteica en la pared vascular. Se utilizaron modelos de coincubación in vitro de plasma rico en plaquetas (PRP) con controles y con segmentos de aorta bovina preincubados con 10 ng.ml de TNF-alfa. En los experimentos de coincubación se utilizaron dos concentraciones diferentes de plaquetas (105 y 107 plaquetas.pocillo). Estos sistemas de coincubación se prepararon utilizando membranas estériles de tipo Transwell-COL(Corning incorporated) con poros de 0.4 mm, que contenían las plaquetas dentro de los pocillos donde estaban emplazados con segmentos de aorta bovina. Se utilizó la electroforesis bidimensional, la espectrometría de masas y la técnica western blot para analizar los cambios en la expresión proteica asociados con el citoesqueleto y el metabolismo energético en los segmentos de aorta. Se determinó la actividad enzimática en la pared vascular siguiendo el método descrito por Misset y Opperdoes. También se cuantificó el contenido de piruvato en las muestras de aorta bovina. En la pared vascular normal disminuyó la expresión de diferentes proteínas relacionadas con el citoesqueleto al coincubar los segmentos de aorta con PRP. Sin embargo, cuando el PRP fue incubado con los segmentos preestimulados con TNF-alfa se modificó un menor número de las proteínas de este sistema. Con respecto al metabolismo energético, en los segmentos controles el PRP no modificó ninguna de las proteínas. Sin embargo, en los segmentos preestimulados la presencia de PRP sobreexpresó la gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa. Además, mediante western blot, se observó que en los segmentos preincubados con TNF-alfa había una disminución de la expresión de la fructosa 1,6-bifosfato aldolasa. No se observaron diferencias en la expresión de la triosa fosfato isomerasa ni en la cadena alfa de la ATP sintasa. Adicionalmente, se observó una disminución significativa de la actividad de la fructosa 1,6-bifosfato aldolasa y del contenido de piruvato sin modificación de la actividad de la triosa fosfato isomerasa. El principal hallazgo de esta tesis fue que en la pared vascular normal las plaquetas pueden modificar la expresión de proteínas asociadas con el sistema contráctil y con el metabolismo energético por sí mismas. Sin embargo, bajo una situación inflamatoria las plaquetas cambian la expresión de un menor número de proteínas asociadas con estos dos sistemas previamente mencionados. La interacción entre las plaquetas y la pared vascular es bidireccional y las plaquetas pueden regular en la pared vascular la expresión de proteínas asociadas con el citoesqueleto y el metabolismo energético, particularmente en la pared vascular normal.