Análisis estructural y funcional del complejo E1E2 del virus de la hepatitis C

Résumé

Los bajos niveles de partículas virales del HCV en el suero de pacientes infectados y la falta de un sistema de replicación in vitro del virus han impedido un análisis directo de las proteínas de la envoltura del HCV, E1 y E2. Para llevar a cabo este análisis se han probado distintos sistemas encaminados a la producción de diversas proteínas quiméricas basadas en los ectodominios de E1 y E2, tanto completos como truncados. Así, utilizando el sistema basado en baculovirus se logró la expresión de la proteína E1340E2661, así como la construcción E2661E1340, proteína quimérica con los ectodominios permitados, que se obtuvo con un rendimiento más elevado. La caracterización espectroscópica (dicroísmo circular y fluorescencia), molecular (glicosilaciones y estado de oligomerización) y antigénica, reveló que ambas proteínas poseían una estructura muy similar, encontrándose plegadas en una conformación que se puede definir como nativa. A continuación, se han determinado las propiedades fusogénicas de E1340E2661 y E2661E1340, observándose que ambas proteínas quiméricas tienen la capacidad de desestabilizar vesículas constituídas por fosfolípidos ácidos a pH 5, mientras que a pH 7 el efecto observado fue mínimo. Asimismo, mediante estudios con distintas líneas celulares se comprobó que e"661E1340 interaccionaba con CD81 y SR-BI, proteínas propuestas como posibles receptores del HCV. Adicionalmente, utilizando drogas inhibidoras de diferentes rutas endocíticas se observó que la entrada de la proteína quimérica en células de origen hepático puede tener lugar mediante diversos mecanismos como fagocitosis, macropinocitosis o mediante vesículas revestidas de clatrina.