Caracterización genómica y proteómica del estrés nitrosativo en candida albicans, importancia de la mitocondria

Zusammenfassung

La importancia que han adquirido las candidiasis invasivas, junto a las limitaciones de los fármacos actuales y la ausencia de métodos de diagnóstico rápido y específico hace necesario profundizar en las investigaciones sobre la patogenicidad de Candida albicans. Datos presentes en la bibliografía han demostrado la importancia de las especies reactivas de nitrógeno (RNS) liberadas por los fagocitos en el control de las infecciones causadas este hongo. Es este sentido, el principal objetivo de este trabajo ha sido profundizar en el estudio de los mecanismos que emplea Candida para adaptarse al estrés nitrosativo para sobrevivir en el hospedador, así como las dianas moleculares más afectadas que van a causar la muerte del hongo. Para ello se han empleado distintas aproximaciones genomicas (microarrays de DNA) y proteómicas (2D-PAGE y espectrometría de masas). En primer lugar se ha elaborado un mapa de referencia (2D-PAGE) de extractos totales de hifas de C.albicans crecidas en condiciones similares a las que se dan en el hospedador, disponible en la base de datos COMPLUYEAST-2DPAGE (Hernández R.et al. 2004) En dichas condiciones de crecimiento se ha establecido un modelo de estrés nitrosativo en C.albicans basado en estudios de toxicidad utilizando el compuesto SIN1 como donador de peroxinitrito (exposición de 2,5 mM de SIN1 durante 6h, 70% de mortalidad). Una de las principales dianas moleculares de daño del peroxinitrito son las proteínas. En este aspecto se ha analizado la presencia y niveles de proteínas oxidadas y nitradas en las células de Candida tras el tratamiento con SIN1, cuya identificación condujo al establecimiento de unos biomarcadores del daño. Se han analizado las alteraciones en la expresión de genes y proteínas causadas por este modelo de estrés para conocer en mayor profundidad los grupos funcionales modificados en respuesta a dicho estrés. La integración de los resultados de expresión diferencial genó