Papel de hpt, un transportador de hexosas fosfato, en la virulencia de listeria monocytogenes

Resumen

Listeria monocytogenes es un microparásito intracelular facultativo cuyo ciclo en el interior de su célula hospedadora incluye una fase de replicación activa en el citosol. Hasta la fecha, no se había descrito ningún gen responsable de esta fase de proliferación intracelular. Este gen ha sido identificado y caracterizado en el presente trabajo de Tesis Doctoral y codifica para una permeasa transportadora de hexosas fosfato a la que hemos denominado hpt (hexose phosphate transporter). Mediante análisis in silicio, hemos observado que el transportador Hpt guarda una elevada homoglía estructural con otros transportadores de hexosas fosfato como UhpT de Escherichia coli, UhpT de Salmonella Typhimurium y el transportador de glicerol-3-fosfato, GlpT, de Bacillus subtilis. Igualmente, Hpt es altamente homólogo al transportador eucariota de hexosas fosfato, G6PT. La realización de árboles filogenéticos incluyendo transportadores eucariotas y procariotas revelaron un posible origen común entre ambos, a la vez que una cercanía entre Hpt y los transportadores de bacterias Gram-negativs. Hemos realizado un análisis in silico de las cajas PrfA, concluyendo que el gen hpt es dependiente de PrtA, el regulador central de la virulencia en Listeria. La mayor parte de los factores de virulencia descritos hasta el momento en L.monocytogenes están sometidos a una regulación positiva por parte de este activador transcripcional. Estos determinantes de virulencia participan activamente en diferentes fases del ciclo intracelular de este patógeno bacteriano. Durante este trabajo, hemos caracterizado Hpt y determinado el papel que ejerce en la virulencia y en la patogénesis de Listeria a través de diferentes ensayos in vitro e in vivo. En primer lugar, hemos construido mutantes de deleción en fase del gen hpt en L.monocytogenes EGD-e (serovar 1/2a) y P14 /(serovar 4b). El fenotipo de los mutantes fue idéntico al de sus receptivas cepa parentales except