Caracterización y clonaje molecular de proteínas del polen de salsola kali

Abstract

INTRODUCCIÓN Salsola kali es una maleza que pertenece al a familia Chenopodiaceae, produce gran cantidad de polen y se la considera la más alergénica de la familia. Se encuentra ampliamente distribuida a lo largo de la costa de Europa, Norte de África, Estados Unidos y Australia. En España aparece en la cuenca del Ebro y en la zona de Alicante, Murcia y Almería. OBJETIVO El objetivo de este trabajo es la caracterización molecular de algunas proteínas del polen de Salsola kali, entre ellas su antígeno mayoritario (42 kDa), y el clonaje de una de sus proteínas alergénicas por reactividad cruzada con Chenopodium album. MATERIAL Y MÉTODOS La caracterización molecular de las proteínas del polen de S.kali se llevó a cabo mediante SDS-PAGE, electroforesis bidimensional, estudios de desglicosilación y de proteínas liposolubles y espectrometría de masas. La caracterización inmunológica se realizó por medio de inmunodetecciones con sueros de 76 pacientes, densitometrados e inmunodetección de las proteínas separadas pro electroforesis bidimenisonal con un pool de sueros y un antisuero de ratón frente a la proteína de 42 kDa de S.kali. Una proteína de S.kali se clonó y expresó. Dado que existía un bloque de la región N-terminal de la proteína de 42 kDa de S,kali, se obtuvieron los cebadores utilizando el extremo N-terminal de una proteína del mismo peso molecular de Chenopodium álbum, que presenta una identidad inmunológica total con S.kali. Se hizo una inmunodetección con los sueros de los pacientes para analizar la reactividad de la proteína recombinante. RESULTADOS 39 proteínas distintas se separan por SDS-PAGE de las cuales un total de 18 son reconocidas por alguno de los sueros. El extracto presenta tanto proteínas glicosilados como liposolubles que son reconocidas por la IgE de un pool de sueros de pacientes sensibilizados. Mediante la electroforesis bidimensional se obtuvieron proteínas de distinto...