Trichinellaidentificación molecular, terapéutica e inmunomodulación experimental

Resumen

Se diseña una herramienta molecular de identificación de especies de Trichinella consistente en el análisis comparado de determinadas regiones genómicas flanqueantes de microsatélites, PCR-ISSR (reacción en cadena de la polimerasa de secuencias intermicrosatélites). Los perfiles electroforéticos de cada especie difieren, distinguiéndose además las genovariedades ¡ntra-específicas. Se identifica así un conjunto de aislamientos procedente de Chile. Se encuentra que todos pertenecen a Trichinella spiralis de genovariedad idéntica a las hispanas y europeas. El análisis de los aislamientos españoles procedentes de la fauna salvaje de dos regiones, Castilla y León y La Rioja demostró la presencia de T.spiralis en esta fauna y especialmente de T. britovi, la especie autóctona, de la que se identifica, además de la genovariedad predominante, C-76 (MCAN/SP/76 ISS11) una nueva genovariedad, interfértil pero diferenciada del resto de las hispanas, así como de T8 de Sudáfrica o T9 de Japón. La secuenciación reafirmó la identidad separada. Un segundo aspecto abordado en la tesis consistió en el estudio biológico (asentamiento, meseta intestinal de adultos y enquistamiento muscular) e histológico, mediante métodos convencionales y electrónicos, del ciclo de T. spiralis sometido a los efectos de ¡nmunomoduladores naturales y de síntesis administrados en un sistema de cesión retardada. En la fase intestinal y de enquistamiento muscular se observan efectos contrapuestos de Anapsos® (PAL), un extracto de Phlebodium pseudoaureum, y Quil (saponinas de Quillaja saponaria). La acción moduladora de PAL se manifiesta favoreciendo al parásito: mejora el asentamiento, prolonga la meseta intestinal, aumentar la carga muscular y protege los quistes musculares. Por el contrario Quil regula a la baja la infección al estimular en cada caso la intensidad de la respuesta celular. Frente a quistes musculares en la etapa inicial de formación, provoca como se observa por microscopía electrónica una desorganización citoplásmica de la célula nodriza. En consecuencia PAL mitiga y Quil estimula la granulomatosis periquística provocada por el antihelmíntico mebendazol. Finalmente se evalúa la secuencia del ciclo de Trichinella como medio para el cribado de nuevos antihelmínticos. Se estudia, comparadamente con otras técnicas in vitro e in vivo de cribado el efecto de la nitazoxanida, un antiparasitario de amplio espectro, demostrándose su nula actividad nematodicida.