Diseño de nuevos soportes recubierto de películas polianiónicas para la inmovilización reversible y mejora de las propiedades de enzimas industriales

Résumé

Se diseña nuevos soportes de agarosa recubiertos de películas de dextrano-aspartico y dextrano sulfato y se evalúan sus propiedades para la inmovilización reversible de enzimas industriales. Se plantean los siguientes subjetivos: A,- Optimización de la preparación de los soportes. B,- Estudio de la inmovilización reversible de enzimas industriales (proceso de inmovilización y fuerza de unión enzima soporte). C,- Mejora de la estabilidad de las enzimas después de la inmovilización. D,- Modulación de la enatioselectividad de lipasas mediante la adsorción a los soportes en diferentes condiciones experimentales. E,- Utilización delos nuevos soportes para la purificación de enzimas industriales. Los nuevos soportes absorben un gran porcentaje de proteínas (un 80% de un extracto crudo de Escherichia coli) en un amplio margen de condiciones experimentales (po., ph comprendido entre 3 y 9). La fuerza de unión de las proteínas es mucho mayor que la fuerza de unión de los soportes hasta concentraciones de cloruro sódico superiores a 200mM y no se desorden completamente has concentraciones de sal superiores a 1M. La adisión de cationes divalentes y trivalentes aumenta considerablemente la fuerza de unión enzima soporte. Los derivados reversibles de varias enzimas de interés industrial (penicilina G acilasa, quimotripsina, tripsina, beta-galactosidasa) son mucho más estables térmicamente que las correspondientes enzimas solubles y también exhiben una muy interesante estabilización frente a disolventes orgánicos. La posibilidad de absorber lipasas sobre los nuevos soportes en muy diferentes condiciones experimentales (presencia de detergente, diferente pH y temperatura, etc.) nos permite alterar, mejorar su enanselectividad para las reacciones de mezclas racémicas de compuestos de interés farmacéutico. Los nuevos soportes nos permite también simplificar la purificación de interesantes enzimas industriales,