Efecto de VIP sobre la regulación de TLRnueva perspectiva para el tratamiento de enfermedades inflamatorias/autoinmunes

Resumen

INTRODUCCIÓN: La inmunidad innata ha desarrollado un sistema de reconocimiento de estructuras moleculares compartidas por grandes grupos de microorganismos, que incluye a los Toll-like receptores (TLR). Éstos desempeñan un papel crucial iniciando la respuesta inmune innata y desencadenando la inmunidad adaptativa. La señalización de los TLRs activa distintos factores de transcripción que causan efectos inflamatorios. TLR4 (cuyo principal ligando es el LPS presente en la membrana externa de bacterias gram-negativas) y TLR2 (receptor de lipoproteínas de bacterias gram-positivas) han sido los más estudiados y se ha demostrado su expresión desregulada en varias enfermedades inflamatorias y autoinmunes. VIP (péptido intestinal vasoactivo) es un inmunopéptido que ejerce una potente acción anti-inflamatoria y potenciadora de respuestas Th2 en distintos modelos de enfermedades murinas y en artritis reumatoide humana. Enfermedad de Crohn y Artritis reumatoide. Son dos enfermedades crónicas con un doble componente inflamatorio y autoinmune Th1. Recientemente se ha sugerido que TLR2 y TLR4 podrían tener un papel en el desarrollo de estas enfermedades. En esta tesis se han abordado los siguientes trabajos de investigación: 1. Estudio de la expresión de TLR2 y TLR4 en células T reguladoras durante el desarrollo de la colitis por TNBS y el efecto que produce el tratamiento con VIP (Citometría de flujo y RT-PCR a tiempo real). 2. Estudio in vitro, con ligandos específicos de TLR2 y TLR4, de las consecuencias fisiológicas del efecto de VIP sobre ambos receptores en las diferentes poblaciones de los ganglios linfoides mesentéricos (Cultivo y ELISA). 3. Análisis del efecto de VIP sobre la expresión de TLR4 en macrófagos y los mecanismos moleculares implicados en el mismo (Cultivos, RT-PCR a tiempo real, ensayos de transfección y luciferasa, EMSA, Western Blotting y citometría). 4. Análisis del efecto de VIP sobre la modulación de la expresión y función de la cascada de señalización inducida por LPS a través de TLR4 en sinoviocitos fibroblásticos de pacientes con artritis reumatoide (cRNA Arrays, RT-PCR a tiempo real, Western Blotting, ELISA). Los resultados obtenidos han supuesto la ampliación del estudio del potencial protector del sistema VIP/PACAP, permitiendo profundizar en la búsqueda de nuevas dianas terapéuticas a través de la posible modulación del sistema VIP/PACAP sobre los receptores Toll-like. Los resultados obtenidos tras el tratamiento con VIP con este abordaje han contribuído al conocimiento acerca de los mecanismos de acción del VIP controlando las primeras etapas de la inflamación, la respuesta Th1 así como la actividad T reguladora, lo cual restablece la homeostasis y previene las enfermedades inflamatorias/autoinmunes estudiadas.