Respuesta inflamatoria temprana de monocitos humanos expuestos a lipoproteínas y cortisol

Resumen

La aterosclerosis es una enfermedad de evolución crónica en la que coexisten desórdenes del metabolismo de los lípidos con procesos inflamatorios y autoinmunes. En este proyecto, nos preguntamos si podría haber un proceso a nivel sistémico, en la que el monocito circulante precondicione su respuesta en virtud del contexto lipídico e inflamatorio en que se desenvuelva, de modo que tenga una determinada predisposición aterogénica al llegar a la lesión y convertirse en residente. Para abordar este estudio se trataron monocitos humanos, extraídos de sangre periférica y monocitos humanos de la línea inmortal THP-1, con concentraciones fisiológicas de componentes lipídicos e inflamatorios sistémicos (LDL, HDL, LDL oxidadas y cortisol) que podrían determinar la respuesta inflamatoria de las células. Tal respuesta se caracterizó in vitro, valorando tras el tratamiento citoquinas extracelulares por citometría de flujo y ELISA. Los experimentos sellevaron a cabo en presencia y ausencia de un agente inductor de inflamación reconocido a este nivel, la IL-1Beta. Las citoquinas valoradas fueron IL-6, TNFalfa, IL-8 e IL-10. Para caracterizar mejor la respuesta inflamatoria inducida del monocito a las lipoproteínas y el cortisol, se diseñaron experimentos en los que se evaluaba el papel de estas moléculas en la activación de NF-kB por EMSA. En este estudio se llevaron a cabo cinéticas de activación de NF-kB para ver diferencias en la respuesta del monocito inducido en presencia de LDL, HDL, cortisol, LDL-cortisol y HDL-cortisol. En los extractos nucleares y citosólicos de los monocitos tratados se valoró IkBalfa por Western Blot, para ver si la activación de NF-kB era dependiente de la degradación de su inhibidor. La última parte del trabajo que recoge la memoria valoró las diferencias entre monocitos de individuos sanos y pacientes hipercolesterolémicos a nivel de receptores nucleares de la familia de PPAR y LXR, concretamente se valoró el RNAm para ABCA-1 y CD36 por PCR cuantitativa. Estos receptores son determinantes en la respuesta del monocito y en la génesis y desarrollo de la aterosclerosis.