Estudio molecular de los genes mlh1 y msh2 en familias españolas con cáncer de colon hereditario no polipósico(HNPCC)

Resum

Para la realización de esta tesis se seleccionaron 82 familias españolas sospechosas de padecer el síndrome de cáncer hereditario no polipósico (HNPCC) en total se estudiaron 239 pacientes. La base molecular de este síndrome son defectos en la reparación de errores que se producen durante la replicación del ADN. En un 90% de los casos es debido a mutaciones en los genes MLH1 o MSH2. Estudiamos en estas familias la inestabilidad de microsatélites MSI por PCR y secuenciación y la Inmunohistoquímica IH como pruebas de identificación de familias portadoras de mutación en MLH1 o MSH2. A la vista de nuestros resultados proponemos la MSI como prueba inicial de selección y la IH como prueba secundaria para determinar cual de los 2 genes es probable que esté mutado. Estudiamos la presencia de mutaciones germinales en estos 2 genes por PCR+DGGE, encontramos 12 mutaciones diferentes en 15 familias en MLH1 y 10 mutaciones diferentes en 10 familias en MSH2, la mayoría de estas mutaciones (88%) se encuentran en familias que cumplen los criterios de Amsterdam I o II, solo un 12% se encuentran en familias con menor agregación familiar. En el 54% de las familias que cumplían los criterios de Amsterdam I o II se encontró mutación frente a solo un 7% en familias que no los cumplen. Las mutaciones en MSH2 fueron mayoritariamentes delecciones con alteración del marco de lectura y producción de una proteina truncada. En MLH1 en cambio predomian los cambios de nucleótidos con generación de un colon de parada o bien de un cambio de aminoácido, la patogenicidad de estos cambios de aminoácido se estudia por LOH y segregación con la enfermedad. No se observan relaciones genotipo-fenotipo claras aunque la presencia de mutaciones en MSH2 se asoció a una menor edad media de diagnóstico de los tumores (48 años frente a 50.4 en portadores de mutación en MLH1) y más proporción de tumores extracolónicos (42% frente a 34%) en ningú