Microorganismos productores de nucleósido fosforilasasaplicación a la síntesis de nucleósidos

Resumen

En la presente Tesis Doctoral nos planteamos encontrar nuevas bacterias selectivas para la síntesis de nucleósidos pro intercambio de base, desarrollar un proceso de síntesis en un paso en condiciones más sostenibles, evaluar la posibilidad de aislar las enzimas intracelulares e inmovilizar las células enteras para poder reutilizar el biocatalizador. El screening primario y secundario y la aplicación de criterios finales de selección, tales como estabilidad operacional, crecimiento bacteriano, reducción de reacciones secundarias y máximo valor de productividad, permitieron seleccionar un número reducido de bacterias: B.atrophaeus y X. Translucens, poco activas en ADA y E.amnigenus y B.subtillis, muy activas en ADA. Las bacterias seleccionadas se emplearon en el estudio de la influencia de algunas variables en dicha síntesis tales como: concentración de ión potasio, temperatura, naturaleza del tampón empleado como medio de reacción, concentración de ión fosfato, inducción de las nucleósido fosforilasas, relación m molar de sustratos y cinética de la reacción. El B.atrophaeus puede realizar la reacción de síntesis a 45º1C con mínima formación de productos secundarios. La productividad de nucleósidos aumento por adición de HEPES al medio de reacción, excepto en el caso del E.amnigenus,. Se logró el inducir la expresó de nucleósido fosforlasas en E. Amnigenus y B.subtilis, y la biosíntesis de adenosina, en el caso del E.amnigenus, el B.subtilis y la X.translucens, puede llevarse a cabo en 20 minutos. El B.atrophaeus puede ctalizar la síntesis de beta-D-arabinofuranosil-adenina (Ara-A), la X.translucens la del 2-fluor-2'desoxiuridina y del beta-D-arabinofuranosil-adenina y el E.amnigenus y el B.subtilis la del nucleósido de 2,6-diaminopurina, con conversiones de 100% y 40% respectivamente. El E .amnigenus y el B.subtilis pueden ser reutilizados en forma libre en la sintesis de adenosina durante 31 a 32 ciclos y cuando se inmovilizaron