Desarrollo y caracterización de un modelo "ex vivo" para el estudio de la tumorigénesis y regeneración cutánea en ausencia del factor de crecimiento endotelial VEGF

Resumen

La angiogénesis consise en la formación de vasos sanguíneos a partir de otros preexistentes. SE trata de un proceso complejo que requiere la interacción coordinada de múltiples tipos celulares. El factor de Crecimiento del Endotelio Vascular (VEGF) es esencial para la angiogénesis cutánea, sin embargo, aún no se ha caracterizado totalmente la función de otras moléculas de señalización vascular específicas, debido, en parte a un posible efecto por parte del VEGF que enmascare dicha función. En este estudio hemos aislado y caracterizado una línea celular de queratinocitos de ratón, inmortalizada espontáneamente, y deficiente en el VEGF, mediante transferencia génica adenoviral de la recombinasa Cre, subcultivos seriados bajo condiciones controladas y clonaje celular. Los análisis de Southern blot y ELISA confirmaron la pérdida completa del VEGF a nivel génico y proteico, respectivamente, en los clones de queratinocitos tratados con la recombinasa. Se ensayaron las tumorigénicas de las células, así como sus características de crecimiento y diferenciación in vitro e in vivo. La inyección subcutánea en ratones inmunodeficientes determinó la ausencia de potencial tumorigénico de la línea celular defiende en el VEGF. El ensayo de diferenciación in vitro, bajo condiciones de elevada concentración de calcio, determinó que estas células mantienen su capacidad de diferenciación normal. Por otra parte, se ensayaron dos modelos de trasplante de cultivo organotípico a ratones inmunodeficientes (cámaras de silicona y trasplante ortotópico). En ambos csdos, los queratinocitos deficientes en el VEGF fueron capaces de formar una piel normal desde el punto de vista de la arquitectura cutánea y organización epidérmica. Muchos estudios describen el establecimiento de líneas celulares de queratinocitos inmortalizadas mediante oncogenes sin embargo en este trabajo hemos generado una línea celular de queratinocitos de ratón deficiente en el prin