El papel del transportador de aminoácidos catiónicos (cat-2). En la inflamación, enfermedades autoinmunes e inmunodeficiencias primarias

Résumé

Aunque el óxido nítrico (NO) es un regulador principal de la inflamación, se ha puesto poca atención en las moléculas que regulan el NO, como el transportador de aminoácidos catiónicos 2 (CAT-2). El objetivo ha sido identificar las citocinas inmunes moduladas en los macrófagos deficientes de CAT2 y estimulados con LPS e IFN-gamma y examinar la respuesta inmune T dependiente de los ratones deficientes de CAT2. Se estimularon ratones adultos controles, deficientes de iNOS y CAT2 de ambos sexos de las cepas FvB/N y C57B1/6 con tioglicolato durante 72h. Los macrófagos peritoneales (PM) se estimularon con 20 unidades/ml de TFN-gamma durante 2h, y luego se añadieron a los medios de cultivo 100 ng/ml LPS durante otras 17h. El RNA total se asiló y tras la transcripción inversa, los productos cDNA se usaron para amplificación por PCR a tiempo real de CAT2, iNOS y varias citocinas. En toros estudios, se inyectó intraperitoricalmente 100 g DNP-KLH en adyuvante completo de Reund a día (d) 0 a los ratones de los tres genotipos de las dos cepas, y se volvió a estimular a d21 con 100 g DNP-KLH en adyuvante completo de Reund ("booster") a los de la cepa C57B1/6. El suero se recogió de d0, d7, d14, d21 y d28 en los ratones FvB/N, y además a d35 en los ratones C57B1/6, determinándose los niveles de inmunoglobulinas séricas por ELISA. Se observó que la expresión de IFN-gamma, IL-10 and IL-4 estaba significativamente aumentada en los macrófagos peritoneales (MP) deficientes de iNOS y CAT2 comparada con los MP controles. La arginasa-I, y no la arginasa-II estaba suprarregulada específicamente en MPO iNOS-/-, sugiriendo que la activiad de la arginasa-I puede estar aumentada en ausencia del uso del sustrato por iNOS. En la cepa FvB/N los niveles de IgG2a e IgG3 estaban disminuidos sólo en los ratones deficientes de CAT2; sin embargo, en la cepa C57/B16 los niveles de IgG2a estaban reducidos drásticamente en los ratones deficientes de i